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禽呼肠孤病毒为呼肠孤病毒科，正呼肠孤病毒属成员，其感染的范围遍布世界各地，易感动物主要包括鸡、火鸡，鸭和鹅等。病毒感染宿主后可引起吸收不良综合征、慢性呼吸道病、病毒性关节炎以及肝炎，心包炎等，对养禽业造成极大危害。为了研究禽呼肠孤病毒在中国的流行情况，本研究通过对2017年1月至12月全国各地疑似禽呼肠孤病毒感染的病料进行检测，进行流行病学调查;并将2013年1月至2017年12月期间分离到的部分毒株进行测序(共18株)，分析国内ARV流行毒株与国外流行毒株间的遗传进化关系;利用LMH细胞、CEL细胞以及sPF鸡胚接种进行ARV分离与纯化，共分离到37株ARV，并对三者分离方法的优劣进行比较;对2013年1月至2016年12月期间分离到6株ARV进行动物毒力回归实验，验证了部分毒株的毒力及致病性。本研究为中国ARV流行病学特点提供科学依据，同时也为进一步研究ARV丰富了毒种资源。本研究的具体内容如下:
1、鸡病毒性关节炎的流行病学调查
为研究禽源呼肠孤病毒在中国的流行情况，本试验利用RT-PCR技术，对2017年1月至12月份全国范围疑似感染禽源呼肠孤病毒的151份病料进行了检测，主要分布于河北、河南、山东、辽宁和江苏省等，确认其中的6l份为禽源呼肠孤病毒阳性病料。另外，将2013～2016年储存于瑞普检测中心毒种库的7份阳性病料一起提取核酸并进行反转录，根据S1基因设计的特异性引物对核酸进行RT-PCR，将扩增产物切胶回收并克隆至pMD18-T载体进行测序分析，测序毒株共计18株。测序结果表明，2017年测序的11株毒株中，10株归于基因6型，流行特点显著。这些结果丰富了中国ARV的基因库，将为新的疫苗研制以及流行病学监测提供理论基础。
2、禽呼肠孤病毒的分离与鉴定
采集2017年1-12月期间疑似感染禽呼肠孤病毒的肌腱及跗关节拭子共151份，利用ARV S1基因序列的检测引物和RT-PCR技术，得到61份阳性病料，阳性率为40.4％。将阳性病料接种LMH细胞、CEL细胞及10日龄SPF鸡胚进行病毒分离，得蜀]ARV毒株共37株。感染ARV的细胞培养物以形成合胞体为特征，初期可见单层细胞逐渐融合成数个较大细胞团，细胞团周围出现空白;后期可见细胞团形成数个合胞体，严重时出现细胞脱落。ARV以绒毛尿囊膜方式接种10日龄SPF鸡胚，一般在7-8日内出现死亡，病变可见绒毛尿囊膜增厚，增厚明显处有白色病变，鸡胚由于出血而通体呈现淡红色或深红色。
3、回归动物实验
为了探究ARV毒株的致病性，本试验选取6株分离得到的ARV毒株以及ARV经典毒株S1133，将其接种于LMH细胞进行病毒纯化，并测定TCID50。同时，将分离到的6株ARV毒株与S1133以爪垫穿刺攻毒方式接种28日龄的SPF白羽肉鸡进行毒力回归试验。结果显示:分离毒株REO-74株、SD150806株、HeN130728株、GX150816株、SD150716株和LN160607株的效价分别为106．1TCID50/0.1mL、106．5TCID50/0.1mL、106．4TCID50/0.1mL、106.1TCID50/0.1mL、106.6TCID50/0.1mL和106．4TCID50/0.1mL，经典毒株S1133株的效价为106．2TCID50/0.1mL。毒力回归试验结果显示:各ARV攻毒鸡均表现出明显临床的症状，表现为精神萎靡、爪垫和关节不同程度肿胀、跛行、严重者出现瘫痪。与S1133株毒力相比，GX150816株毒力较弱，SD150716株、LN160607株、RE0-74株、HEN130912株的毒力较强。
1、鸡病毒性关节炎的流行病学调查
为研究禽源呼肠孤病毒在中国的流行情况，本试验利用RT-PCR技术，对2017年1月至12月份全国范围疑似感染禽源呼肠孤病毒的151份病料进行了检测，主要分布于河北、河南、山东、辽宁和江苏省等，确认其中的6l份为禽源呼肠孤病毒阳性病料。另外，将2013～2016年储存于瑞普检测中心毒种库的7份阳性病料一起提取核酸并进行反转录，根据S1基因设计的特异性引物对核酸进行RT-PCR，将扩增产物切胶回收并克隆至pMD18-T载体进行测序分析，测序毒株共计18株。测序结果表明，2017年测序的11株毒株中，10株归于基因6型，流行特点显著。这些结果丰富了中国ARV的基因库，将为新的疫苗研制以及流行病学监测提供理论基础。
2、禽呼肠孤病毒的分离与鉴定
采集2017年1-12月期间疑似感染禽呼肠孤病毒的肌腱及跗关节拭子共151份，利用ARV S1基因序列的检测引物和RT-PCR技术，得到61份阳性病料，阳性率为40.4％。将阳性病料接种LMH细胞、CEL细胞及10日龄SPF鸡胚进行病毒分离，得蜀]ARV毒株共37株。感染ARV的细胞培养物以形成合胞体为特征，初期可见单层细胞逐渐融合成数个较大细胞团，细胞团周围出现空白;后期可见细胞团形成数个合胞体，严重时出现细胞脱落。ARV以绒毛尿囊膜方式接种10日龄SPF鸡胚，一般在7-8日内出现死亡，病变可见绒毛尿囊膜增厚，增厚明显处有白色病变，鸡胚由于出血而通体呈现淡红色或深红色。
3、回归动物实验
为了探究ARV毒株的致病性，本试验选取6株分离得到的ARV毒株以及ARV经典毒株S1133，将其接种于LMH细胞进行病毒纯化，并测定TCID50。同时，将分离到的6株ARV毒株与S1133以爪垫穿刺攻毒方式接种28日龄的SPF白羽肉鸡进行毒力回归试验。结果显示:分离毒株REO-74株、SD150806株、HeN130728株、GX150816株、SD150716株和LN160607株的效价分别为106．1TCID50/0.1mL、106．5TCID50/0.1mL、106．4TCID50/0.1mL、106.1TCID50/0.1mL、106.6TCID50/0.1mL和106．4TCID50/0.1mL，经典毒株S1133株的效价为106．2TCID50/0.1mL。毒力回归试验结果显示:各ARV攻毒鸡均表现出明显临床的症状，表现为精神萎靡、爪垫和关节不同程度肿胀、跛行、严重者出现瘫痪。与S1133株毒力相比，GX150816株毒力较弱，SD150716株、LN160607株、RE0-74株、HEN130912株的毒力较强。