SiRNA HO-1在无机砷抑制树突状细胞功能中的可能影响

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目的:本研究通过探索siRNA(Silencing RNA,沉默RNA)HO-1(Heme oxygenase-1,血红素单加氧酶-1)在无机砷抑制树突状细胞功能中的可能影响,进而探讨HO-1在无机砷介导免疫抑制中的作用,从而为防治砷中毒相关疾病提供参考。研究方法:1、诱导培养小鼠BMDCs(Bone marrow-derived dendritic cell,小鼠骨髓来源树突状细胞)。2、检测指标与方法:(1)采用基因沉默的方法建立HO-1沉默BMDCs。(2)采用Western blot方法检测DC(Dendritic cell,树突状细胞)中HO-1蛋白含量。(3)采用实时定量PCR方法检测DC中相关细胞因子含量。结果:1、HO-1沉默降低了无机砷暴露的BMDCs HO-1蛋白和mRNA的表达。应用Control siRNA与HO-1 siRNA转染BMDCs后,与si Ctr组和si HO-1组中LPS组比较,si Ctr组和si HO-1组中的As+LPS组HO-1蛋白和mRNA表达水平均有所上升;与si Ctr组中As+LPS组相比较,si HO-1组中HO-1蛋白和mRNA表达水平有明显下降。差异均具有统计学意义(P<0.05)。2、HO-1沉默增加了砷暴露的BMDCs中协同刺激分子和趋化粘附因子的mRNA表达。与si Ctr组中As+LPS组比较,si HO-1组中As+LPS组Cd86、Cd40、Ccr5、Ccr7的mRNA转录水平均有所升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。3、HO-1沉默使砷暴露的BMDCs中前炎症因子的mRNA表达升高。与si Ctr组中As+LPS组比较,si HO-1组中As+LPS组中Il-1β的mRNA转录水平的表达有所升高。差异具有统计学意义(P<0.05)。4、HO-1沉默增加了砷暴露的BMDCs中Th1、Th2、Th17以及Treg型细胞因子mRNA的表达。与si Ctr组中As+LPS组比较,si HO-1组中As+LPS组中前炎症因子、Th1、Th2、Th17以及Treg型细胞因子的mRNA转录水平的表达均有所升高,其中细胞因子Il-12b、Il-4、Il-6、Il-23a、Il-10的差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、HO-1沉默可以增加砷暴露的BMDCs协同刺激分子CD86、CD80以及趋化粘附因子Ccr5、Ccr7的mRNA表达。2、HO-1沉默可以增加砷暴露的BMDCs前炎症因子Il-1β的mRNA表达。3、HO-1沉默可以增加暴露的BMDCs中Th1型细胞因子Il-12b、Th2型细胞因子Il-4、Th17型细胞因子Il-6和Il-23a以及Treg型细胞因子Il-10的mRNA表达。
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