本研究根据Gen Bank发布的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列,利用Premier5.0软件设计合成g B基因的特异性引物,设计引物扩增g B开放阅读框第190-524氨基酸残基(aa)的基因。对目的片段进行克隆、酶切及测序鉴定后,产物插入p ET-30a载体中,转化至表达大肠杆菌Rosetta,以构建p ET-30a-gB(190-524)重组质粒。对诱导表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,该表达产物以大小为41.4Ku的包涵体形式存在。Western blot(免疫印迹试验)结果显示该蛋白具有良好的反应原性。以纯化的g B截短蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为1.25g/mL,血清的最佳稀释度为1:20,S/P≥0.294判定为阳性。本方法对牛病毒性腹泻(BVD)、口蹄疫(FMD)、牛结核(BTB)、布病(BR)4种疾病阳性血清均不发生交叉反应。组内变异系数低于10%,组间变异系数低于11%。与IDEXX公司的g B-ELISA商品化试剂盒进行比较,阳性符合率为84.28%,阴性符合率为85.71%。本研究建立的ELISA方法为疾病防制工作提供参考。对黑龙江省哈尔滨、阿城、密山、绥化、齐齐哈尔、饶河、黑河七个地区的10个牛场的血清样品进行了牛传染性鼻气管炎的血清学调查,共1377份,阳性率最高为65.52%,最低为5.56%。2009至2014年间,其中2011年被检血清抗体阳性率最高为37.22%,2012年被检血清抗体阳性率最低为10.23%,并且2012年至2014年被检血清抗体阳性率呈现递增趋势。