目的：探讨程序性死亡受体1(programmed cell death protein-1，PD-1）单克隆抗体对体外诱导扩增的细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced killer cells，CIK）抗肺癌效应的影响并进行机制研究，有助于指导肺癌的免疫治疗，为PD-1单克隆抗体联合CIK细胞免疫疗法治疗肺癌提供实验依据及技术指导。
　　方法：收集大连市中心医院肿瘤内科2019年1月至2019年5月确诊的20名中晚期肺癌患者（16名腺癌，4名鳞癌）外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），通过干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）、抗CD3抗体和白介素-2（Interleukin-2，IL-2）等细胞因子体外诱导扩增为CIK细胞，采用流式细胞仪分析其表型。复苏大连市中心医院中心实验室细胞库冷藏的肺癌A549细胞，传代培养后用于细胞实验。A549细胞杀伤实验分为两组，分别为PD-1单克隆抗体联合CIK细胞组和单独CIK细胞组。采用CCK-8法分别检测不同效靶比条件下（effect target ratio，E：T）两组CIK细胞对肺癌A549细胞杀伤活性。同上述实验分组一样，设PD-1单克隆抗体联合CIK细胞培养组和单独CIK细胞培养组进行实验，用流式细胞仪检测两组穿孔素及颗粒酶表达阳性比例，Elisa法检测两组IL-2、IFN-γ及肿瘤细胞坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）细胞因子分泌水平。建立裸鼠肺癌肿瘤模型，成瘤后（肿瘤体积达到100mm3）设置两个实验组，分别给予小鼠单独CIK细胞治疗和CIK细胞联合PD-1单克隆抗体治疗，同时设立磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline，PBS)治疗小鼠为对照组。绘制各组小鼠肿瘤体积生长曲线。根据上述分组方式进行小鼠生存独立实验并比较各组小鼠的生存期。
　　结果：通过多种细胞因子体外诱导扩增20名中晚期肺癌患者外周血单个核细胞后得到CIK细胞，其中CD3+CD56+细胞亚群所占比例为31.58%±7.63%。CCK8法检测CIK细胞对肺癌A549细胞的杀伤效应随效靶比增大而增大，PD-1单克隆抗体提高了不同效靶比条件下CIK细胞对A549肺癌细胞的杀伤效应,E∶T为5∶1（28.5%±1.9%vs20.3%±1.8%）、10：1(40.6%±2.4%VS31.7%±2.1%)、20：1(57.4%±3.5%VS44.7%±3.8%)、40：1(74.1%±8.3%VS60.8%±5.3%)，PD-1单克隆抗体联合CIK细胞组和单独CIK细胞组在不同效靶比条件下对肺癌A549细胞的杀伤效应均具有统计学差异（P＜0.05）。流式细胞仪检测结果提示抗PD-1单克隆抗体提高了CIK细胞的干扰素和颗粒酶释放阳性比例，CIK细胞联合PD-1单克隆抗体组与单独CIK细胞组相比二者干扰素释放阳性比例：（46.7±3.5）%VS（35.1±2.2）%，二者颗粒酶释放水平：（34.6±3.8）%VS（25.7±3.3）%，均具有统计学差异（P＜0.05）。同样PD-1单克隆抗体联合CIK细胞组与单独CIK细胞组相比也提高了IL-2、TNF-α、IFN-γ细胞因子的分泌水平：（5409±168.8）pg/ml VS（4300±132.3）pg/ml,（252.65±16.7）pg/ml VS（172.5±8.62）pg/ml，（327.2±23.5）pg/ml VS（209.7±16）pg/ml,各组间具有统计学差异（P＜0.05）。小鼠肺癌肿瘤模型显示PD-1单克隆抗体联合CIK细胞治疗与单纯CIK细胞治疗相比明显减缓裸鼠肺癌模型肿瘤体积的增长，二者具有统计学差异（P＜0.05），对照组小鼠（PBS）肿瘤体积为（782.12±214.78）mm3、单独CIK细胞治疗组小鼠肿瘤体积为（527.21±135.29）mm3、CIK细胞联合PD-1单克隆抗体组小鼠肿瘤体积为（329.31±71.32）mm3。CIK细胞联合PD-1单克隆抗体在延长小鼠生存期方面也有明显优势，就对照组（PBS）中位生存时间35天而言，单独应用CIK细胞治疗组中位生存时间为42天，抗PD-1联合CIK细胞治疗组中位生存时间长达49.5天，三组间生存率均具有统计学差异（P＜0.05）。
　　结论：PD-1单克隆抗体能够促进CIK细胞杀瘤物质的释放，提高CIK细胞对肺癌A549细胞的杀伤效应，推测肺癌患者在进行CIK细胞过继治疗前输注PD-1单克隆抗体可能更有利于疾病的治疗，PD-1单克隆抗体联合CIK细胞治疗有希望成为一种新型的肺癌免疫疗法。