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为了探讨豆豉溶栓酶（Douchi Fibrinolytic Enzyme,subtilisin DFE）前肽的功能,并在大肠杆菌（Escherichia coli）中高效表达豆豉溶栓酶,优化豆豉溶栓酶的复性条件和提高豆豉溶栓酶的纯化得率,本研究共构建了4种表达质粒。将豆豉溶栓酶全编码序列（pre-pro-DFE）克隆到pET29a中,表达产物pre-pro-DFE主要以包涵体形式存在于破菌后的沉淀中,破菌上清中未检测到成熟的豆豉溶栓酶,说明pre-pro-DFE没有发生正确的复性和切割。将豆豉溶栓酶前肽—成熟肽编码序列（pro-DFE）克隆到pET32a中,豆豉溶栓酶与硫氧还蛋白以Trx-pro-DFE形式融合表达时,表达产物主要以Trx-pro-DFE形式存在于包涵体中,破菌上清中含有成熟的豆豉溶栓酶,有很强的溶栓酶活性。将豆豉溶栓酶成熟肽编码序列克隆到pET32a中,豆豉溶栓酶与硫氧还蛋白以Trx-DFE形式融合表达,表达产物以Trx-DFE形式同时存在于包涵体和破菌上清中,但破菌上清中未检测到成熟的豆豉溶栓酶,也无溶栓酶活性。 通过对不同缓冲液的透析和用不同缓冲液稀释进行复性时发现,变性的pre-pro-DFE、Trx-pro-DFE及hisTrx-pro-DFE可以通过透析和稀释复性,而不含前肽的Trx-DFE则不能,证明前肽对豆豉溶栓酶的正确折叠与切割是必需的。变性Trx-pro-DFE通过透析或稀释复性时,溶液澄清,复性效率高,其中透析复性优于稀释复性,而透析的优选缓冲液为0.5mol/L（NH4）2SO4,20mmol/LTris-HCl（pH8.0）。当变性pre-pro-DFE通过透析或稀释复性时,溶液混浊,大部分pre-pro-DFE以沉淀形式析出,复性效率低。这些结果说明,硫氧还蛋白可