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人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin HCG)是一种涎糖蛋白。HCG的合成与分泌与妊娠密切相关,目前制备早早孕所用抗体均为完整的单克隆抗体,但在制备特异性、灵敏度更高的抗独特性抗体时,相对分子质量较小IgG片段显示出诸多优于完整抗体的特性。这是因为F(ab’)2的相对分子质量是IgG相对分子质量的2/3,且抗体Fc的去除使小分子F(ab’)2产生的空间位阻更少,更有利于抗体与抗原的结合。故本实验采用了廉价的纸纤维作载体,对木瓜蛋白酶进行固定化反应,考察了各因素对固定化酶制备的影响。固定化木瓜蛋白酶对IgG进行水解反应,得到的F(ab’)2片段通过不同的方法进行纯化,通过比较和优化,建立了良好的纯化F(ab’)2的方法。为其临床应用于HCG快速诊断奠定了基础,并为其它单克隆抗体的纯化提供了一定的参考价值。主要实验结果如下:1.以纸纤维作载体,经环氧氯丙烷活化后,再加入对苯二胺水溶液对纸纤维进行胺化。以胺化的纸纤维为载体,利用戊二醛载体交联法,制备固定化木瓜蛋白酶。所制备的固定化酶活性较高,酶与载体结合牢固,不易脱落,固定化酶的重复利用性较高。2.腹水分别采用辛酸-硫酸铵沉淀法和蛋白A亲和层析法进行纯化,经前者纯化后的抗体纯度可达90%左右,后者纯化后抗体纯度可达99%以上。3.抗HCG抗体片段的制备:主要优化固定化酶消化的最优条件,然后采用固定化酶消化抗HCG抗体制备IgG片段,同时也采用两种游离酶分别对抗HCG抗体进行消化,考察各种消化结果。结果表明游离木瓜蛋白酶水解抗HCG抗体制备片段为F(ab’)2,主要杂质为Fc片段和游离的木瓜蛋白酶,水解率为100%,纯度为74%,纯化后样品纯度为94%,得率为39%。4.抗HCG抗体IgG片段的纯化:结果表明,DEAE-Sepharose-FF阴离子交换层析柱较为合适本实验所制备IgG片段的纯化,无论是从梯度洗脱还是分步洗脱,都能较好地实现IgG片段与其他杂蛋白的分离。5.抗HCG抗体IgG片段的纯度及活性检测:由凝胶成像系统分析游离木瓜蛋白酶水解的到的F(ab’)2纯度约为74%,由固定化木瓜蛋白酶水解得到的F(ab’)2纯度约为84%。固定化木瓜蛋白酶制备的F(ab’)2片段具有免疫活性,1:12 000。