植物不育表达载体的构建与功能分析

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外来植物入侵已经成为危害本地生态环境和农林业生产的主要因素之一,造成了巨大的经济损失。有不少外来植物是人们有意引进的,具有重要的利用价值和经济价值。但是它们旺盛的自我繁殖能力和长期的栽培使得它们容易演化成外来入侵物种,对当地的物种造成严重威胁。对于通过种子进行繁殖的外来植物,如果能够培育出不育的品种,则就可以大大削弱、甚至消除其侵略性。 拟南芥AP3基因控制其雄蕊的发育。本试验根据AP3基因5’上游序列设计引物,利用PCR技术克隆了一个1.7 kb的AP3基因启动子,测序结果证明该DNA片段与GenBank公布的序列一致。将该启动子与编码RNA酶的细胞毒性基因barnase连接,构建成无花药植物基因表达盒P <,Ap3>-barnase-Tnos,将该基因表达盒切下后,克隆到由 pCAMBIA-1305.1 改造而成的质粒 pCAMBIA-PNN-Pnos-GUS上,构成了无花药植物基因表达载体pCAMBIA-P<,ap3>-bamase-Tnos。将该载体转化根癌农杆菌EHA105,再用农杆菌感染烟草无菌苗叶片。感染的叶片在MS+2mg/L BA+0.1 mg/L NAA+100/μM乙酰丁香酮培养基上共培养3d后,再转到选择再生培养基(MS+2mg/L BA+0.1 mg/L NAA+100 mg/L timentin+50 mg/L,kanamycin)上;不定芽形成后,将其切下,转到MS+1 mg/L IBA+50 mg/L timentin上生根。22株再生植株的叶片经GUS染色液染色后,有17株被染成蓝色,表明它们是转基因植株。17株基因植株移栽到温室后生长正常,为验证所构建的无花药植物基因表达载体的功能创造了条件。
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