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目的探讨抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体相关血管炎(MPO-AAV)患者中性粒细胞内PAD4的表达及其临床意义。方法本研究纳入39例初发未治疗MPO-AAV患者(病例组)和39例健康志愿者(对照组)。通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测中性粒细胞内肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(peptidylarginine deiminase 4,PAD4)表达水平;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测患者外周血抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体(myeloperoxidase antineutrophil cytoplasmic antibody,MPO-ANCA)及两组研究对象外周血补体C5a(Complement 5a,C5a)的水平;评估每例患者伯明翰血管炎活动度评分(BVAS)。比较2组受试者的检测结果,分析病例组内各检测指标间的关系。结果(1)入选的39例MPO-AAV患者临床诊断均为MPA,病程1~125(4[1,24])月,在多脏器损害中肺和肾损害最多见,分别为100%(39/39)和87.2%(34/39),其他临床损害包括神经系统20.5%(8/39)、关节肌肉17.9%(7/39)、心脏30.8%(12/39)、眼耳鼻15.4%(6/39)及皮肤黏膜10.3%(4/39)。BVAS评分为6~33(21.0±6.0),肾BVAS评分为0~12分(12[8,12]),肺BVAS评分为4~6分(6[6,6])。病例组患者年龄22~88(67.6±12.7)岁,病例组男性23例,女性16例;健康对照组年龄21~81(65.3±10.3)岁,对照组男性22例,女性17例,病例组与健康对照组年龄及性别分布无明显差异,均具有可比性(P>0.05)。(2)流式细胞术检测结果显示,与健康对照组比较,病例组PAD4+中性粒细胞比例及PAD4 MFI均显著高于对照组(70.5%±10.6%vs 25.9%±6.4%,P(27)0.001;32.9±4.5 vs 14.3±4.3,P(27)0.001);ELISA检测结果示,病例组C5a表达水平显著高于对照组(4630.8±1050.1 vs 2879.6±967.5,P(27)0.001);(3)病例组中,PAD4+中性粒细胞比例分别与C5a、MPO-ANCA、BVAS及肾BVAS呈正相关(分别为r=0.443,P=0.005;r=0.783,P(27)0.001;r=0.992,P(27)0.001;r=0.508,P=0.001),PAD4 MFI分别与C5a、MPO-ANCA、BVAS及肾BVAS呈正相关(分别为r=0.398,P=0.012;r=0.771,P(27)0.001;r=0.897,P(27)0.001;r=0.530,P=0.001);(4)病例组中,MPO-ANCA与BVAS及肾BVAS呈正相关(分别为r=0.872,P(27)0.001;r=0.550,P<0.001)。C5a与肾BVAS呈负相关(r=-0.354,P=0.027)。结论1.中性粒细胞内PAD4可能通过促进活化中性粒细胞NETs的释放,间接增加MPO-ANCA的水平,加重MPO-AAV患者的病情,MPO-ANCA水平的升高可能促进PAD4产生;2.中性粒细胞内PAD4可能通过促进激活中性粒细胞NETs的释放,激活补体旁路途径产生更多的C5a,通过C5a-C5a R途径活化中性粒细胞,进而促进中性粒细胞内PAD4的表达,中性粒细胞内PAD4与C5a之间形成恶性循环参与发病;3.中性粒细胞内PAD4可能通过活化中性粒细胞释放NET促进适应性免疫和先天性免疫,通过恶性循环的自体免疫反应,参与MPO-AAV的发病和临床损害,PAD4可能成为潜在的临床治疗靶点;4.本实验研究支持MPO-ANCA是可以导致MPO-AAV临床损害的致病抗体,以及C5a参与临床损害。