人参皂苷Rh2对荷结肠癌CT-26小鼠抗瘤作用及免疫指标的影响

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目的:研究人参皂苷Rh2对荷瘤小鼠抗肿瘤作用及对免疫指标的影响,寻求抗肿瘤作用强而毒副作用小的中药有效成分。方法:首先进行肿瘤细胞系的培养传代。肿瘤细胞培养至一定数量时,用胰蛋白酶消化重悬,制备成肿瘤细胞悬液,接种于32只健康雌雄各半BALB/c小鼠右侧颈背部皮下,建立荷小鼠结肠癌CT-26动物模型。2周后动物肿瘤模型已稳定,除正常对照组外,将成瘤均匀且肿瘤大小相近的24只荷瘤小鼠模型随机分成3组:0.4%乙醇灌胃对照组、人参皂苷Rh2(0.4%乙醇混悬液)灌胃治疗组、5-FU腹腔注射治疗组。治疗21天后,各组小鼠称重,摘取小鼠眼球,收集血液标本,静置离心后吸取上层血清取样,Elisa(酶联免疫吸附)法测定各组小鼠血清IL-2水平,用酶标仪在450nnm波长下测量各小鼠血清的OD(吸光度)值并用应用labsys雷勃酶标仪软件v5.01计算出各孔的IL-2浓度;剥取荷瘤小鼠皮下移植瘤标本,电子天平称重并做好记录,以计算各组荷瘤小鼠抑瘤率。然后取样,用10%福尔马林固定,标本用免疫组织化学染色后,在倒置显微镜下检测各组小鼠皮下移植瘤内CD25+细胞,早期凋亡肿瘤细胞Cleaved-caspase3表达情况;摘取各组小鼠胸腺、脾脏,电子天平称重后,做好记录,以计算各种小鼠胸腺指数及脾指数。结果:1.人参皂苷Rh2灌胃组与酒精灌胃对照组相比,其抑瘤率为81.76%,5-FU腹腔注射治疗组与酒精灌胃对照组相比,其抑瘤率为91.32%。2.人参皂苷Rh2对荷结肠癌小鼠皮下移植瘤内的早期凋亡肿瘤细胞表达Cleaved-caspase3的影响:人参皂苷Rh2灌胃组与酒精灌胃对照组相比,小鼠皮下移植瘤内的早期凋亡肿瘤细胞Cleaved-caspase3表达率明显增加(P<0.01),具有显著统计学意义。3.人参皂苷Rh2(0.4%乙醇混悬液)灌胃治疗组与5-FU腹腔注射治疗组相比,小鼠皮下移植瘤内的早期凋亡肿瘤细胞Cleaved-caspase3表达率不及后者(P<0.01)。4.5-FU腹腔注射治疗组同人参皂苷Rh2灌胃组、酒精灌胃对照组相比胸腺指数、脾脏指数、血清IL-2水平均明显降低(P<0.05)。5.人参皂苷Rh2对荷结肠癌小鼠的免疫器官的影响:在该实验中人参皂苷Rh2灌胃组与酒精灌胃对照组相比,小鼠的胸腺指数、脾脏指数差异无统计学意义(P>0.05)。6.人参皂苷Rh2对荷结肠癌小鼠的细胞因子的影响:人参皂苷Rh2灌胃组与酒精灌胃对照组相比,小鼠的血清IL-2水平差异无统计学意义(P>0.05)。7.人参皂苷Rh2对荷结肠癌小鼠皮下移植瘤内的CD25+细胞的影响:人参皂苷Rh2灌胃组与酒精灌胃对照组相比,小鼠皮下移植瘤内的CD25+细胞浸润无明显增多(P>0.05)。8.小鼠荷瘤以后,胸腺指数、脾脏指数、血清IL-2水平均较正常小鼠降低(P<0.05),与前人动物实验结果一致。结论:人参皂苷Rh2 0.4mg/kg(0.4%乙醇混悬液)经口服能够显著抑制小鼠结肠癌CT-26肿瘤细胞生长,增加小鼠皮下移植瘤内的早期凋亡肿瘤细胞Cleaved-caspase3阳性表达率,促进小鼠结肠癌CT-26肿瘤细胞凋亡,但作用不及5-FU。从毒副作用方面来说,人参皂苷Rh2 0.4mg/kg经口服在发挥抗肿瘤作用的同时没有抑制荷瘤小鼠免疫功能。但对提高荷小鼠结肠癌CT-26小鼠胸腺指数、脾指数血清IL-2水平,肿瘤局部CD25+细胞阳性表达率也无明显作用。
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