随着人们生活水平不断提高,对海洋水产品的需求量也不断增大,在水产品加工过程中产生大量的海洋水产下脚料,目前对这些下脚料仅进行简单加工成猪饲料或废弃,这不仅对资源造成浪费,而且对环境造成污染。自1946年开始,人们就开始探究如何提高下脚料的附加值[1],近几年许多学者利用下脚料制备生物活性肽。惠安某食品有限公司,是一个利用马鲛鱼生产鱼卷的企业,每年在马鲛鱼加工过程产生很多的鱼皮鱼骨等下脚料有待开发利用。本文以马鲛鱼鱼皮为原料,采用磁性固定化酶法和膜分离方式相结合的工艺制备生物活性肽,以期提高水产下脚料的附加值。具体研究内容如下:1.以羟基自由基清除率为指标,采用三种游离酶(中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶)分别对马鲛鱼鱼皮进行酶解制备抗氧化肽,实验结果表明中性蛋白酶制备的抗氧化肽活性最高,并通过响应面法优化中性蛋白酶制备抗氧化肽的工艺条件,得到制备抗氧化肽的最佳工艺为:固液比1:32 g/ml、酶底比570 U/g、酶解时间4 h、温度52℃、pH 6,此条件下的羟基自由基清除率为99.78±0.11%。2.以对大肠杆菌的抗菌率为指标,采用中性蛋白酶酶解马鲛鱼鱼皮制备抗氧化肽,并通过响应面法优化工艺条件,得到制备抗菌肽的最佳工艺为:固液比2:30 g/ml、酶底比6200 U/g、酶解时间3 h、温度53℃、pH 6.50,此条件下的抗菌率为63.45±0.28%。3.采用吸附法制备磁性固定化酶,根据2-Level Factorial原理优化工艺条件,得到制备磁性固定化酶最佳工艺条件:粒子量15 mg、加酶量0.60 mg、反应时间1.50 h、pH 6、转速125 r/min、温度25℃,在此条件下实验测的酶活回收率60.56±0.25%,固定化酶酶活1556.14±6.67 U/g。采用磁性固定化酶制备生物活性肽,磁性固定化酶重复使用4~5次酶活保留率达到50%左右。4.采用微滤、超滤和纳滤对蛋白酶酶解液进行分离,得到3组不同分子量范围的组分:MAOI组分(截留分子量:<500 Da)、MAOII组分(截留分子量:500~3000 Da)、MAOIII组分(截留分子量:>3000 Da)。羟基自由基清除率最高的是MAOI组分(96.20±1.31%),其次是MAOII组分(76.21±0.84%),最后是MAOIII组分(59.68±0.20%)。利用RP-HPLC对MAOI组分进一步纯化,得到5种组分。5.对MAOI组分的稳定性实验结果表明,温度和冻融次数会降低MAOI组分活性,但仍保持良好的抗氧化性。延长放置天数可以使抗氧化肽活性略有升高,说明马鲛鱼鱼皮抗氧化肽具有良好的稳定性。