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目的:研究β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-GalT-I)在人外周血CD4+辅助性T细胞(helper Tlymphocyte,Th)中的表达与定位,以及β-1,4-GalT-I对CD4+Th细胞粘附能力的影响,初步探讨β-1,4-GalT-I在CD4+Th细胞粘附过程中的作用。
方法:
1.采用免疫磁珠阳性分选法分离纯化人外周血CD4+Th细胞,通过RT-PCR、荧光免疫细胞化学法和激光共聚焦技术鉴定CD4+Th细胞中β-1,4-GalT-I的表达与定位。
2.将人外周血CD4+Th细胞分四组进行诱导培养:Fresh组不加任何细胞因子,IL-2组加入rhlL-2(10U/m1),IL-12组加入rhlL-2(10U/m1)+rhIL-12(2ng/m1),IL-4组加入rhlL-2(10U/m1)+rhIL-4(100ng/m1),通过半定量RT-PCR、流式细胞术检测各组CD4+Th细胞中β-1,4-GalT-I的表达变化,运用层粘连蛋白结合实验比较各组CD4+Th细胞粘附能力的改变。
3.用a-乳清蛋白干扰人外周血CD4+Th细胞表面β-1,4-GalT-I的活性及底物特异性,行层粘连蛋白结合实验分析其对各组CD4+Th细胞粘附能力的影响。
结果:
1.人外周血CD4+Th细胞中表达长型和短型β-1,4-GalT-I,且基本均匀分布于细胞表面和细胞浆内。
2.rhlL-2、rhIL—12、rhlL-4等细胞因子组合诱导人外周血CD4+Th细胞活化分化前后,各组CD4+Th细胞中长型B-1,4-GalT-I的表达水平、细胞膜表面β-1,4-GalT-I的表达水平、细胞粘附能力都各有差异,其中rhIL-2活化的IL-2组CD4+Th细胞与静止状态的Fresh组CD4+Th细胞相比较上述三个数据均有所增强,rhlL-2+rhlL-12诱导培养的IL.12组CD4+Th细胞又比IL-2组CD4+Th细胞均增高,rhlL-2+rhlL-4诱导培养的IL-4组CD4+Th细胞则比IL-2组CD4+Th细胞均降低。且分析可得CD4+Th细胞中长型β-1,4-GalT-I、细胞膜表面β-1,4-GalT-I的表达水平均与细胞粘附能力呈现正相关关系。
3.经a-乳清蛋白干扰人外周血CD4+Th细胞表面β-1,4-GalT-I的活性及底物特异性,各组CD4+Th细胞粘附能力均发生不同程度的降低。结论:定位于人外周血CD4+Th细胞膜表面的长型β-1,4-GalT-I与细胞粘附能力密切相关,提示CD4+Th细胞表面长型β-1,4-GalT-I可能参与细胞粘附过程并在其中发挥重要作用。