【摘 要】
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根据已发表的α-醇溶蛋白基因和LMW-GS基因的序列保守性,分别设计了特异引物对野生二粒小麦、阿拉拉特小麦、提莫菲维小麦的α-醇溶蛋白基因和低分子量谷蛋白基因完整编码区进
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根据已发表的α-醇溶蛋白基因和LMW-GS基因的序列保守性,分别设计了特异引物对野生二粒小麦、阿拉拉特小麦、提莫菲维小麦的α-醇溶蛋白基因和低分子量谷蛋白基因完整编码区进行扩增,并对扩增产物回收、克隆、测序和分析。主要结果如下: 1.从野生二粒小麦材料As842中获得4个α-醇溶蛋白基因序列GliTd-1、GliTd-2、GliTd-3和GliTd-4,GenBank登录号分别为DQ140349、DQ140350、DQ140351和DQ140352。其中,GliTd-3和GliTd-4编码区长度均为861bp,编码由267个氨基酸残基组成的蛋白,其中信号肽包含19个氨基酸残基;而GliTd-1和GliTd-2编码区分别长821bp和859bp,由于编码区内存在提前终止密码子和插入/缺失引起的移码突变,推测其为不表达的假基因。基于通用密码子,估算GliTd-3和GliTd-4编码的成熟蛋白的相对分子量分别为30.85和30.87kD。序列比对显示,这4个基因与已报道的α-醇溶蛋白基因一致性较高;蛋白质一级结构中有6个保守的半胱氨酸;重复区的重复单元与已知基因有区别;成熟蛋白N末端前60个氨基酸组成的序列对乳糜泻病人毒性更大;脯氨酸密码子的使用有明显的偏好;谷氨酰胺在整个蛋白中含量丰富,但在特定的区域呈现集中分布的特点。 2.从野生二粒小麦材料As842中获得3个LMW-GS基因序列LMW-Td1、LMW-Td2和LMW-Td3。LMW-Td1的GenBank登录号为AY748826。其中,LMW-Td1和LMW-Td3编码区长度分别为858bp和1062bp,可分别编码包含284个和352个氨基酸残基的成熟蛋白;LMW-Td2编码区长900bp,由于编码区内存在3个提前终止密码子,推测其为不表达的假基因。根据LMW-Td1和LMW-Td3的氨基酸序列估算的分子量分别为32kD和40kD。根据N-末端氨基酸序列,可将LMWD-1、LMWD-2和LMWD-3归为LMW-m型LMW-GS基因。
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