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肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起断奶仔猪腹泻的主要致病性大肠杆菌之一。本研究利用本实验室已建立的猪源肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌毛基因型PCR分子鉴定方法,对湖北省武汉市中粮肉食品有限公司商品猪场进行了ETEC菌毛基因型分布特征调查,确定了F18和K88是引起该猪场断奶仔猪腹泻的ETEC两种最主要的菌毛蛋白基因型。从而针对性的在早期断奶仔猪日粮中应用由本实验室通过基因工程技术将融合蛋白基因faeG-linker-fedF在大肠杆菌中表达,并诱导产生制备的双价卵黄抗体,通过动物试验研究该卵黄抗体在预防和控制断奶仔猪腹泻的作用效果,并进一步研究该卵黄抗体对断奶仔猪生长性能及粪样菌群的影响。结果如下:1.以ETEC标准菌株为试验材料,对试验猪场(湖北省武汉市中粮肉食品有限公司商品猪场)进行ETEC流行病学调查。结果表明,通过设计特异性引物,经PCR扩增,标准菌株都可以扩增出对应的目的片段。对2008年348份来源于试验猪场新生仔猪(76份)、哺乳仔猪(87份)和断奶仔猪(185份)的腹泻粪样进行了ETEC K88、K99、F18、F41及987P的PCR检测,结果显示,共有154份含有猪源致病性大肠杆菌菌毛基因K88、K99、987P、F41和F18中的一种或几种,占腹泻粪样总数的44.25%。在这154份阳性样品中,120份含有F18菌,占77.92%,是最主要的一种菌毛基因型;检出率仅次于F18的菌毛基因型是K88,其携带K88的样品数有27份,占17.53%;另外,含F41的有15份,占菌毛基因阳性样品总数的9.74%,K99的有3份,占1.95%;987P的有1份,占0.65%。本次调查结果还显示其中12份样品被检测出同时携带有2种菌毛基因,其中7份共同携带K88和F18,占4.55%;2份同时携带K88和F41,占1.30%;2份同时携带K99和F18,占1.30%;还有1份携带F18和987P。以上结果表明,F18和K88是引起该猪场仔猪出现肠毒素大肠杆菌性腹泻最主要的两种菌毛基因型,适合利用本实验室制备的卵黄抗体作针对性的应用效果研究。2.通过饲养试验研究了由融合蛋白FaeG-FedF免疫获得的喷雾干燥全蛋粉,添加于氨基酸平衡的断奶仔猪日粮中对仔猪腹泻及生长性能的影响。试验选择24±2d断奶仔猪180头,随机分成3组,每组3个重复栏,20头/栏。分别以添加3%血浆蛋白粉的日粮和添加1.5%普通全蛋粉的日粮为对照组,添加1.5%由融合蛋白FaeG-FedF免疫制备的高免全蛋粉的日粮为试验组。试验结果显示,试验各个阶段,不同日粮处理对断奶仔猪腹泻产生了显著影响(P＜0.01)。试验前期(0-14d),添加了含特异性卵黄抗体SDEP的融合蛋白FaeG-FedF组和普通全蛋粉组的腹泻率显著低于血浆蛋白粉组(P＜0.01),添加特异性卵黄抗体组的腹泻率与普通全蛋粉组相比差异不显著。试验后期(15-28d),各组日粮一致,添加特异性卵黄抗体组和血浆蛋白粉组的腹泻率显著低于普通全蛋粉组(P＜0.01),添加特异性卵黄抗体组的腹泻率与血浆蛋白粉组相比差异不显著。试验全期(0-28d),添加特异性卵黄抗体组的腹泻率显著低于血浆蛋白粉组和普通全蛋粉组(P＜0.01),添加血浆蛋白粉组的腹泻率与普通全蛋粉组相比差异不显著(P＞0.05)。试验各阶段,不同日粮处理组的仔猪腹泻指数也存在显著差异(P＜0.01),日粮中添加特异性卵黄抗体可以减轻断奶仔猪的腹泻程度。试验各阶段所有日粮处理组仔猪均表现出较好的生长速度,仔猪7周龄体重均能达到15kg以上,但各组之间不存在显著差异(P＞0.05)。试验0-14d,各组的平均日增重、料肉比不存在显著差异。此结果表明在仔猪断奶后1-2周,日粮中添加普通全蛋粉和融合蛋白FaeG-FedF有利于促进仔猪生长,提高仔猪的饲料利用率,与日粮中添加血浆蛋白粉具有类似的作用效果。试验15-28d,所有试验仔猪停止饲喂添加SDPP或SDEP的日粮,而使用同一种日粮,结果显示,血浆蛋白粉组和融合蛋白FaeG-FedF组的平均日增重显著高于普通蛋白粉组(P＜0.05),其中,血浆蛋白粉组达到极显著水平(P＜0.01)。这一阶段各组的料肉比也存在极显著的差异,与普通全蛋粉相比,血浆蛋白粉组和融合蛋白FaeG-FedF组显著降低(P＜0.01)。在试验全期,血浆蛋白粉组和融合蛋白FaeG-FedF组的料肉比显著低于普通全蛋粉组(P＜0.05)。本试验各阶段,各组的采食量均未出现显著性差异。3.利用PCR/DGGE技术研究了融合蛋白FaeG-FedF免疫获得的喷雾干燥全蛋粉,添加于氨基酸平衡的断奶仔猪日粮中对断奶仔猪粪样菌群的影响。在动物试验过程中,分别采集血浆蛋白粉对照组、普通全蛋粉对照组和试验组仔猪断奶当天(试验前)及断奶后7d和21d的粪样,利用PCR/DGGE技术分析断奶前后仔猪粪样细菌区系的变化。粪样细菌16S rDNA的V6-V8可变区经PCR扩增,扩增产物经DGGE电泳后再进行条带数、相似性和多样性分析。结果表明,仔猪断奶当天粪样细菌DGGE谱带数较少,各组间不存在显著性差异(P＞0.05)。但血浆蛋白粉组多样性显著高于普通全蛋粉组和高免全蛋粉组(P＜0.05),相似性分析显示各组间仔猪粪样菌群相似性低于30%,说明仔猪断奶前虽然有些细菌为所有仔猪共有,但是细菌菌群种类和数量差异较大;仟猪断奶7d时高免全蛋粉组粪样细菌DGGE谱带数和多样性均显著高于断奶当天(P＜0.05),而血浆蛋白粉组和普通全蛋粉组谱带数和多样性与断奶当天相比,不存在显著性差异(P＞0.05)。经相似性分析发现,仔猪断奶7d时DGGE图谱属于明显的3簇,高免全蛋粉组、普通全蛋粉组和血浆蛋白粉组分别各为一簇,其菌群相似性分别约为78%、80%和83%。高免全蛋粉组和血浆蛋白粉组细菌菌群多样性指数显著高于普通全蛋粉组(P＜0.05)。说明日粮对仔猪粪样菌群有显著的影响,饲喂同种日粮后,使菌群的种类趋于一致;仔猪断奶21d,各组饲喂同一种日粮,与7d时DGGE图谱相比,高免全蛋粉组和血浆蛋白粉组仔猪粪样细菌多样性显著降低(P＜0.05),普通全蛋粉组差异不显著(P＞0.05)。以上结果提示,高免全蛋粉添加于早期断奶仔猪日粮中可以使仔猪粪样菌群变得复杂、多样。