奈达铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的作用及其作用机制的初步研究

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研究目的:观察奈达铂对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响,初步研究奈达铂对SKOV3/DDP细胞的作用及潜在的作用机制,为顺铂耐药卵巢癌的化疗方案的选择提供实验理论依据。  方法:  1.体外培养SKOV3/DDP细胞株,反复间歇梯度浓度给予药物顺铂,刺激维持冻存的SKOV3/DDP细胞耐药性的稳定,以提供良好的体外实验研究平台及条件。  2.经不同浓度梯度的奈达铂(2、4、8、16、24、32、64、96μg/ml)和顺铂(2、4、8、16、24、32、64、96μg/ml)分别作用SKOV3/DDP细胞株12h、24h、36h,采用MTT比色法检测SKOV3/DDP的细胞增殖抑制情况。  3.经不同浓度梯度的奈达铂(8、16、24μg/ml)和顺铂(8、16、24μg/ml)作用SKOV3/DDP细胞36h,采用流式细胞术检测SKOV3/DDP的细胞凋亡及细胞周期。  结果:  1.奈达铂及顺铂对SKOV3/DDP细胞增殖的影响:奈达铂及顺铂对SKOV3/DDP细胞增殖有抑制作用。随着奈达铂与顺铂浓度的增加及作用时间的延长,细胞抑制率有增加的趋势。奈达铂(8、16、24、32、64及96μg/ml)作用SKOV3/DDP细胞12h、24h后,各组间抑制率比较有统计学意义(P<0.05);奈达铂(2、4、8、16、24、32及64μg/ml)作用SKOV3/DDP细胞36h后,各组间抑制率比较有统计学意义(P<0.05)。顺铂(8、16、24、32、64及96μg/ml)作用SKOV3/DDP细胞12h后,各组间抑制率比较有统计学意义(P<0.05);顺铂(2、4、8、16、24、32及64μg/ml)作用SKOV3/DDP细胞24h后,各组间抑制率比较有统计学意义(P<0.05);顺铂(2、4、8、16及24μg/ml)作用SKOV3/DDP细胞36h后,各组间抑制率比较有统计学意义(P<0.05)。  在16、24、32、64及96μg/ml浓度组,奈达铂对SKOV3/DDP细胞分别作用12h、24h后,细胞增殖抑制率低于同浓度同作用时间的顺铂组(P<0.05);在2、4、8、16、24、32、64及96μg/ml浓度组,奈达铂对SKOV3/DDP细胞作用36h后,细胞增殖抑制率低于同浓度同作用时间的顺铂组(P<0.05)。本实验研究提示奈达铂对SKOV3/DDP细胞增殖的抑制作用低于顺铂。  2.奈达铂及顺铂对SKOV3/DDP细胞凋亡的影响:结果提示奈达铂及顺铂对SKOV3/DDP有诱导细胞凋亡作用,且随着药物浓度的增加,诱导细胞凋亡率也逐渐增加(P<0.05)。奈达铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡率低于同浓度顺铂组(P<0.05)。  3.奈达铂及顺铂对SKOV3/DDP细胞周期的影响:结果提示奈达铂及顺铂与空白对照组相比,可诱导SKOV3/DDP细胞周期阻滞在细胞周期的S期。奈达铂(8、16、24μg/ml)作用SKOV3/DDP细胞36h后,G0/G1期细胞所占比例逐渐减少,S期细胞所占比例逐渐增加,G2/M期细胞所占比例无明显变化,但各浓度组比较无统计学差异(P>0.05)。顺铂(8、16、24μg/ml)作用SKOV3/DDP细胞36h后,G0/G1期细胞所占比例逐渐减少,S期细胞所占比例逐渐增加,G2/M期细胞所占比例无明显变化,且各浓度组比较有统计学差异(P<0.05)。  结论:  1.奈达铂及顺铂均能抑制SKOV3/DDP的细胞增殖,抑制作用呈剂量—时间依赖性。奈达铂对SKOV3/DDP细胞的增殖抑制作用低于同浓度顺铂,提示了在本实验条件下奈达铂对SKOV3/DDP细胞的抗肿瘤活性弱于顺铂。  2.奈达铂及顺铂均能诱导SKOV3/DDP细胞凋亡。在本实验条件下奈达铂诱导SKOV3/DDP的细胞凋亡作用低于同浓度顺铂。  3.奈达铂及顺铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡的可能机制是使SKOV3/DDP细胞阻滞在细胞周期S期。
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