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中医药自古就讲求用药个体化,基因组学的发展,为个体化用药提供了理论支持。当遗传变异和药物疗效之间的相互作用逐渐被人们意识到时,将基因组的研究应用于药物治疗领域便开始流行起来。从中药复方中提取的多糖能增强机体免疫力,并有研究表明,多糖不仅能被MHCⅡ类分子呈递而被TCR识别,激活适应性细胞免疫应答,亦能有效地激活B淋巴细胞,诱导特异性抗体的产生。而鸡主要组织相容性复合体基因(MHC)的多态性使得不同个体对相同抗原有不同免疫反应,从而导致机体免疫功能存在个体差异,进而可能影响中药多糖免疫增强剂量的筛选。另外,从中药复方中提取的多糖的免疫调节作用机制尚不十分清楚。目的:1.研究前期对小鼠免疫增强效果显著的纯化后中药复方多糖对雏鸡免疫功能的影响,筛选其最适免疫增强剂量。2.研究MHC B-LβII基因第2外显子RFLP多态性对鸡免疫功能的影响及纯化后中药复方多糖对不同MHC B-LβII基因型鸡免疫力的影响,探讨中药复方多糖免疫增强剂量的筛选是否受MHCB-LβII基因第2外显子多态性的影响。3.研究TLR2是否是中药复方多糖促进淋巴细胞增殖和细胞因子IL-12分泌的作用受体。4.研究中药复方多糖对淋巴细胞内第二信号分子cAMP和cGMP含量的影响。方法:1.采用MTT法和ELISA法测定首免后8、14、21、28、35、42天盐酸左旋咪唑、黄芪多糖和不同剂量纯化后中药复方多糖组鸡T、B淋巴细胞增值、血清中新城疫抗体水平、细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-12含量、超氧化物歧化酶活性及红细胞免疫功能。2.采用PCR-RFLP方法,分析雄性良凤青脚麻鸡MHC B-LβII基因第2外显子多态性。3.采用MTT法和ELISA法测定首免后8、14、21、28、35、42天不同MHC B-LβII基因型鸡及使用了纯化后的中药复方多糖的不同MHC B-LβII基因型鸡外周血T、B淋巴细胞增值,新城疫抗体水平及细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-12含量,采用RT-PCR法测定IFN-γ、IL-4和IL-12mRNA表达量。4.采用ELISA法和RT-PCR法测定终浓度为50μg/mL中药复方多糖的淋巴细胞悬液和不同浓度TLR2抗体、NF-κB阻断剂PDTC共培养48h后的细胞上清液中IL-12含量及其mRNA表达量。5.采用ELISA法测定终浓度为50μg/mL中药复方多糖与淋巴细胞共培养20mim、1h、2h、4h、8h后细胞中cAMP和cGMP的含量;结果:1.纯化后中药复方多糖和黄芪多糖与对照组相比,均能显著增强外周血T、B淋巴细胞增值,提高新城疫抗体水平,促进细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-12分泌,提高超氧化物歧化酶活性,升高红细胞-C3b花环率和红细胞-IC花环率,盐酸左旋咪唑的各项免疫性状测定结果虽高于对照组,但无显著性差异(p>0.05),并且中剂量纯化后中药复方多糖免疫增强效果最好。2.MHC B-LβII基因第2外显子经Hin1I酶切后检测到A、B两种等位基因和AA、AB、BB三种基因型,其中AA、AB基因型个体T、B淋巴细胞增殖活性、ND抗体水平、IFN-γ和IL-4含量均高于BB基因型个体;IL-12含量在三种基因型间无明显差异(p>0.05)。3.中药复方多糖剂量和MHC B-LβII基因型这两个因素对各免疫性状均有显著影响,但中药复方多糖剂量与MHC B-LβII基因型之间的交互作用仅对T、B淋巴细胞增殖、ND抗体水平、IFN-γ含量有显著影响;不同MHC B-LβII基因型机体增强免疫力的最适中药复方多糖剂量不同,高剂量中药复方多糖组中AA基因型个体B淋巴细胞增殖和新城疫抗体水平显著高于BB基因型,中剂量中药复方多糖组中AB基因型个体T、B淋巴细胞增殖、ND抗体水平显著高于AA基因型,低剂量中药复方多糖组中AB基因型个体T淋巴细胞增殖和ND抗体水平显著高于BB基因型,IFN-γ在各剂量中药复方多糖组中的优势基因型均是AB基因型。4.在含有中药复方多糖的外周血淋巴细胞中加入TLR2抗体和PDTC后,中药复方多糖促进淋巴细胞中IL-12mRNA表达和IL-12的合成受到抑制,并且随着TLR2抗体和PDTC浓度的增加,抑制中药复方多糖促进IL-12的生成作用明显增强。5.中药复方多糖能显著提高体外培养的鸡外周血淋巴细胞中cAMP和cGMP含量。结论:1.中药复方多糖的免疫增强效果优于黄芪多糖和盐酸左旋咪唑,并且中剂量中药复方多糖免疫增强效果最好。2.MHC B-LβII基因第2外显子Hin1I位点多态性导致的个体遗传差异在一定程度上影响中药复方多糖最适免疫增强剂量的筛选,不同基因型组中药复方多糖的最适免疫增强剂量略有不同。3.中药复方多糖促进淋巴细胞增殖和细胞因子IL-12分泌的作用机制可能是:中药复方多糖与淋巴细胞表面TLR2结合,激活TLR2-NF-κB信号转导通路,改变细胞信号分子cAMP和cGMP的含量,使信号通路中的蛋白质磷酸化而具有生物活性,进而活化核转录因子NF-κB,调控IL-12在细胞内的转录和表达。