论文部分内容阅读
本试验利用酯酶同工酶及RAPD技术对青岛市19个樱花品种进行亲缘关系鉴定和品种分类研究。以一年生枝的树皮为材料进行了19个樱花品种的酯酶同工酶研究。为确保樱花RAPD反应的稳定性和重复性,本研究对基因组DNA的提取方法和RAPD反应体系中MgCl<,2>浓度、dNTPs浓度、Taq酶用量、引物浓度、模板DNA浓度、退火温度、PCR循环次数等影响扩增结果的重要因素进行了优化。利用优化的反应体系从60条随机引物中筛选出32条,然后进行二次筛选用于聚类分析,建立了UPGAM系统聚类图。试验主要得到以下结论:
(1)青岛市19个樱花品种的酯酶同工酶酶谱共有12条酶带,其中P<,7>为基本酶带,活性强,为所有供试品种所具有;其他谱带在各品种间存在缺省情况。
(2)青岛市樱花EST同工酶酶谱的系统聚类分析结果与形态学结果基本一致,证明了种源、重瓣性和花色可作为品种分类的重要指标,有较好的稳定性。
(3)适于樱花基因组DNA提取的方法为改良的CTAB法。
(4)适于樱花RAPD扩增的最优反应体系为:20ul总反应体系中,1×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl<,2>,0.15 mmol/L dNTP,1U Taq酶,0.2umol/L 10bp随机引物,20~30ng模板DNA。最佳扩增程序:94℃预变性4min,94℃变性30s,38℃退火30s,72℃延伸2min,循环40次,最后72℃延伸10min,12℃保存。
(5)从60条S系列随机引物中筛选出32条扩增效果较好的引物用于19个樱花品种的RAPD扩增。32条引物共扩增出了533条带,其中多态性带为406条,多态率达76.17%。平均每个引物扩增出16条带,s8和s107最多可达到21条。
(6)RAPD分析所得聚类图将19个樱花品种分为2大类群,第1类群主要为杂交樱系;第2类群根据花的重瓣性、枝姿和花色又可分为2个亚类群和3类。证明了樱花的种源、重瓣性、枝姿和花色都可作为资源调查和品种分类的重要指标。研究结果与以前形态学、数量学、孢粉学和生物化学分类法的结果基本一致。