小反刍兽疫(Peste des petits ruminants，PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus，PPRV)引起的一种严重危害小反刍动物的急性、热性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将PPR列为需要通报的动物传染病，危害性极大，发病动物死亡率为100％，并且目前对于该病没有切实可靠的治疗措施，因此对于PPR的防控至关重要。对本病的的防控最常用和经济的方法是疫苗免疫接种，对免疫效果检测常通过检测免疫抗体水平来评价，酶联免疫吸附试验(ELISA)是监测抗体水平简单有效的方法，但目前国内市场用于有效检测PPRV抗体水平的试剂盒还是比较缺乏，并且大多数为进口试剂盒，虽然检测效果较为可靠，但其成本高，限制了其在防控PPR中的应用，需要研发PPR抗体检测试剂盒，用于临床检测。N蛋白为PPRV的核衣壳蛋白，其生物学功能多、保守性强，是PPRV中特异性最高、含量最丰富以及免疫原性最强的结构蛋白，是研制PPR抗体检测试剂盒的首选蛋白。　　本研究从PPR疫苗毒中克隆获得PPRV N蛋白全基因，原核表达和鉴定后，收集目的蛋白并进行复性。以复性后的N蛋白作为包被抗原，建立检测PPR免疫抗体的间接ELISA方法并进行初步应用。研究获以下结果:　　1.PPRV疫苗株N蛋白的基因克隆和原核表达:从PPR疫苗毒中通过RT-PCR克隆N基因全序列，基因长度为1578bp，将目的基因连接至pET-28a载体，构建重组原核表达质粒pET-28a-N。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21，筛选获得重组表达菌pET-28a-N/BL21。诱导表达的最佳条件为:IPTG1.0mmol/L，诱导7h。表达的蛋白主要以包涵体形式存在，蛋白的大小约为58ku。Western-blot检测表明，复性后的N蛋白具有良好的特异性和反应性。　　2.PPR抗体检测间接ELISA方法的建立和初步应用:以纯化复性后N蛋白为包被抗原，建立检测PPRV抗体的间接ELISA方法。抗原每孔包被400ng，阳性血清和待检血清做1∶200倍稀释，每孔加入100μL，37℃作用2h，酶标二抗以1∶8000倍稀释，每孔加入100μL，37℃作用1h，TMB显色时间为20min，该间接ELISA的临界值为0.309;特异性和敏感性均良好;重复性试验表明，批内和批间OD450值的变异系数分别在2.29％～8.65％和2.13％～5.68％;用本试验建立的体系对临床上197份山羊血清进行检测，PPR抗体阳性率为85.79％，与标准试剂盒的符合率为96.4％。