胃癌组织中DCC mRNA表达变化及意义

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结直肠癌缺失基因(deleted colorectal carcinoma DCC)是迄今为止发现的最长的抑癌基因,位于人类染色体18q21.3,其编码一种分子量为190 kD的跨膜磷酸化蛋白。  目的:  胃癌是常见的恶性肿瘤之一,预后较差,进展期胃癌患者术后5年生存率为20%~50%。本课题检测胃癌组织中DCC基因mRNA的表达水平,探讨其与胃癌发生、发展及临床病理特征的关系,并且为胃癌的早期诊断、治疗及预后提供参考依据。  方法:  胃癌患者52例,手术中留取胃癌组织与癌灶旁5 cm以上的正常胃组织标本。从两组标本中分别提取总RNA;应用RT-PCR两步法和目的基因片段克隆测序的方法,检测DCC基因mRNA在胃癌组织与癌旁正常组织中的表达水平。  采用SPSS20.0统计学软件。正常胃组织与胃癌组织中DCC mRNA表达阳性率比较采用Fisher确切概率法;不同临床病理类型的病人胃癌组织中DCC mRNA相对表达量比较采用t检验及方差分析。P<0.05说明差异有统计学意义。  结果:  1.基因克隆及序列测定  PCR产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳分离,依据相对分子量的大小(215 bp)确定目的条带,回收目的基因(DNA凝胶回收试剂盒Omega公司)。将回收的目的基因与pMD19-T载体连接后,转化至感受态大肠杆菌DH5α菌中,经氨苄西林抗性及蓝白斑筛选出阳性菌落,每个PCR产物挑选5~12个白色菌落,送上海生工生物工程有限公司测序。确定PCR扩增片段为目的基因DCC及内参GAPDH。  2.DCC基因表达结果  52例癌旁组织标本中均检测到DCC基因的表达;52例胃癌组织标本中,有44例不同程度的表达DCC基因,阳性表达率为84.6%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。以GAPDH为标准参照,检测DCC mRNA相对表达水平,胃癌组织为0.555±0.087,癌旁组织为0.796±0.095,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01)。  3.DCC基因mRNA表达与临床、病理参数的关系  将同一例病人检测的DCC mRNA相对水平相比,即检测mRNA相对水平=(RT-PCR产物电泳带的净光密度值)/(GAPDH RT-PCR产物电泳带的净光密度值),所得数值与临床、病理参数分组进行统计学处理。可以看出,不同性别胃癌患者,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同年龄的胃癌患者中,<60岁组,其DCC基因mRNA的相对表达水平是0.75±0.15,≥60岁组,其DCC基因mRNA的相对表达水平是0.84±0.09,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同病变部位的胃癌组织中,DCC基因mRNA在贲门组的表达水平是0.85±0.13,在胃体组的表达水平是0.78±0.10,在胃窦组的表达水平是0.78±0.12,三组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。DCC基因mRNA在淋巴结转移阴性组中的表达水平是1.07±0.10,在淋巴结转移阳性组中的表达水平是0.59±0.08,两组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期的胃癌患者中, DCC基因mRNA在I期、II期患者的表达水平是1.21±0.11,在III期、Ⅳ期患者的表达水平是0.57±0.08,两组比较,差异具有显著的统计学意义(P<0.005)。不同病理学分级、组织学分化程度胃癌患者中,DCC基因mRNA在高分化及中分化胃癌患者的表达水平是1.05±0.10,在低分化(未分化)胃癌患者的表达水平是0.58±0.05,两组比较,差异具有统计学意义( P<0.05)。  结论:  1.DCC基因在癌旁组织中均检测到阳性表达;  2.胃癌组织中DCC基因mRNA的表达水平较癌旁正常组织中明显下降;表明 DCC基因mRNA的低表达可能是胃癌发生发展的影响因素。  3.胃癌组织中DCC基因mRNA的相对表达水平与肿瘤大小、病人年龄及病变部位没有相关性。  4.胃癌组织中DCC基因mRNA的相对表达水平与淋巴结转移呈负相关,但与淋巴结转移数目无明显相关性。  5.胃癌组织中DCC基因mRNA的相对表达水平与TNM分期呈负相关,与病理学分级、组织学分化程度呈正相关。说明DCC基因mRNA在胃癌侵袭转移等过程中有一定影响,将来可能成为检验胃癌进展的肿瘤标记物之一。
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