论文部分内容阅读
第一部分ONC201抑制TRAIL耐药的三阴乳腺癌细胞的生长目的:三阴乳腺癌(TNBC)是一种恶性、侵袭性乳腺癌,对广泛使用的常规、靶向化疗药和内分泌治疗不敏感。课题组之前的研究提示:大多数TNBC细胞系对TRAIL敏感,然而,TRAIL耐药又很容易发生,限制了 TRAIL的应用。在这个研究中,我们评估一种TRAIL基因的新型小分子诱导剂一ONC201对TNBC的抗癌作用。方法:对三阴乳腺癌MDA231细胞进行长期剂量递增的TRAIL给药,筛选出存活下来的TRAIL耐药的细胞系MDA231R。通过MTT和克隆形成试验检测ONC201对TNBC细胞生长的作用。我们也利用蛋白质印迹来检测ONC201对Caspase-8,Caspase-3及PARP的作用。结果:我们的数据提示:ONC201有效抑制了 TNBC细胞系生长,同时也抑制了 TRAIL耐药的TNBC细胞系生长。ONC201在亲本和TRAIL耐药TNBC细胞系中都能诱导凋亡蛋白。结论:我们的研究提示,ONC201通过诱导凋亡,能有效抑制亲本和TRAIL耐药的TNBC细胞系生长。第二部分ONC201抑制三阴乳腺癌细胞生长的机制研究目的:探讨内质网应激在ONC201抑制三阴乳腺癌(TNBC)细胞生长中的作用。方法:通过Western blot和real-time PCR检测ONC201给药后三阴乳腺癌细胞系的内质网应激相关蛋白和mRNA水平表达变化。通过分别敲除IRE1和ATF4,检测MDA231和MDA468细胞系内质网应激相关蛋白的表达及凋亡情况。结果:ONC201在MDA231和MDA468细胞系中,诱导了 IRE1,ATF4,CHOP的表达。敲除IRE1后,细胞对ONC201的反应无明显差异,而敲除ATF4后,细胞对ONC201表现出耐药特性。结论:ONC201通过诱导ATF4介导内质网应激通路而诱导凋亡。第三部分ONC201耐药三阴乳腺癌细胞株的筛选及对药物敏感性研究目的:构建ONC201耐药三阴乳腺癌(TNBC)细胞株并初步探讨其对TRAIL,ONC201及化疗药物的敏感性。方法:对三阴乳腺癌MDA231细胞和MDA468细胞进行长期剂量递增的ONC201给药,筛选出存活下来的ONC201耐药的三阴乳腺癌细胞株MDA231R-ONC201和MDA468R-ONC201。通过MTT和克隆形成试验来检测ONC201耐药TNBC细胞对TRAIL的敏感性。利用蛋白质印迹来检测亲本和ONC201获得性耐药三阴乳腺癌细胞系中,ONC201 在不同浓度条件下对 IRE1,p-IRE1,eIF2α,p-eIF2α,ATF4,CHOP的作用。通过MTT检测亲本和ONC201耐药细胞系对紫杉醇和顺铂的敏感性。结果:ONC201耐药TNBC对TRAIL敏感性显著降低。在ONC201耐药TNBC细胞系中,ATF4、CHOP的活化被减弱了。ONC201耐药细胞系对紫杉醇和顺铂的敏感性与亲本细胞系的一样。结论:我们的研究提示ONC201耐药的TNBC细胞对TRAIL也耐药。ONC201是通过激活ATF4介导的内质网应激通路来诱导凋亡的。ONC201耐药的细胞系仍然对常规化疗药物敏感。