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哺乳动物精子发生是一个复杂而精密的过程,由很多基因参与调控,对雄性动物的繁殖性能具有重要影响。磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglycerate mutase 1,PGAM1)和磷酸丙糖异构酶1(triosephosphate isomerase 1,TPI1)是糖酵解代谢过程中的关键酶。睾丸支持细胞可通过糖酵解途径为生精细胞的发育提供能量底物。因而探究PGAM1和TPI1基因在雄性藏绵羊生殖器官中的表达及生物学功能对深入理解其调控机制具有重要的意义。本实验以性成熟前(3月龄)、性成熟(1岁)和成年(3岁)3个较为关键发育期的雄性藏绵羊生殖器官作为试验材料,克隆了PGAM1和TPI1基因的完整CDS区序列,进行生物信息学分析;采用qRT-PCR和Western blot方法从转录和翻译水平检测了藏绵羊生殖器官中PGAM1和TPI1 mRNA和蛋白表达量,运用免疫组织化学染色法检测PGAM1和TPI1蛋白在不同年龄藏绵羊睾丸和附睾组织内表达定位,初步探究了PGAM1和TPI1对雄性藏绵羊生殖器官中的影响。主要研究结果如下:1.藏绵羊PGAM1基因CDS区全长为765 bp,可编码254个氨基酸;蛋白质结构预测结果表明PGAM1由α-螺旋(47.64%)、延伸链(9.45%)、β-转角(6.30%)和无规卷曲(36.61%)构成;TPI1基因CDS区全长为861 bp,可编码286个氨基酸;蛋白质结构预测结果表明TPI1蛋白质由α-螺旋(47.55%)、延伸链(16.78%)、β-转角(5.59%)和无规卷曲(30.07%)构成。2.PGAM1 mRNA和蛋白在不同发育阶段雄性藏绵羊睾丸和附睾中均存在高表达;PGAM1蛋白主要存在于不同发育阶段睾丸支持细胞和间质细胞中,并且在生殖母细胞和精原细胞中也有分布;附睾组织中,PGAM1蛋白在性成熟以后附睾内的精子尾部、不同发育期附睾假复层柱状纤毛上皮以及疏松结缔组织中表达。结果表明:PGAM1基因可能主要参与调节睾丸支持细胞内的糖酵解代谢途径,也在生殖母细胞的迁移和分化以及间质细胞的功能维护中发挥作用。3.TPI1 mRNA和蛋白在不同发育阶段雄性藏绵羊睾丸和附睾中均有表达,但主要在1岁龄和3岁龄表达;TPI1蛋白主要分布于所有发育阶段的睾丸支持细胞和性成熟后(1岁和3岁)附睾中的精子尾部,在睾丸内的间质细胞、生精细胞以及附睾内的假复层柱状纤毛上皮也有较弱的阳性信号。结果表明,TPI1基因可能参与调节睾丸支持细胞和精子鞭毛的糖代谢途径以及附睾假复层柱状纤毛上皮的分泌功能,从而促进精子的形成和成熟。研究结果表明,PGAM1和TPI1基因与其他已知该基因编码序列的哺乳动物具有很高的同源性。他们可能主要通过糖酵解代谢途径调控精子的形成及成熟过程,其调控机制有待进一步探究。