大黄鱼溶菌酶对鳗弧菌胁迫的响应研究

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大黄鱼(Larimichthys crocea),属于硬骨鱼纲鲈形目,是我国传统的“四大海产”之一。随着大黄鱼人工养殖日益兴起,高密度、集约化养殖模式加速了鱼体微生物病症的发生,出现了如鱼体生长衰退、抗病能力弱、品质低等问题,严重影响并制约了大黄鱼养殖业的健康持续发展。鳗弧菌是养殖大黄鱼出现弧菌病的主要病原菌之一,而溶菌酶是鱼体内杀菌的关键酶,本文以大黄鱼为研究对象,研究溶菌酶在大黄鱼不同组织表达情况,并通过鳗弧菌侵染和ploy(I:C)处理,研究溶菌酶基因的胁迫反应,希望可以为以后大黄鱼的免疫调节机制研究提供一定的理论支持。主要结论如下:通过大黄鱼基因组数据库获得大黄鱼两种溶菌酶CDNA全长序列,并通过克隆测序进行验证,c型溶菌酶CDNA全长为763bp,编码110个氨基酸,其基因组数据库登录号为XM-010753143.1;g型溶菌酶CDNA全长为879bp,编码193个氨基酸,其基因组数据库登录号为XM-010740410.1。鱼类c型溶菌酶与哺乳动物的亲缘关系较近,鱼类g型溶菌酶同鸟类亲缘关系较近。研究两种溶菌酶基因在大黄鱼脾脏、肾脏、肝脏、心脏、肌肉、鳃、肠、脑这8种组织表达特异性情况,表明c型溶菌酶在肝脏中的表达量最高,在心和肠中的表达量略高于其他组织;g型溶菌酶在肠和肾表达量最高,其次是腮和肝、脾。鳗弧菌侵染实验证明:在肝脏、脾脏、肾脏组织中,c型溶菌酶的表达量比对照组低,但鳗弧菌侵染6h后,肾脏中c型溶菌酶表达显著升高;g型溶菌酶的表达量呈先升高后降低趋势,在肝脏中,鳗弧菌处理下g型溶菌酶在12h表达量达到峰值;ploy(I:C)处理下在24h表达量达到峰值。在脾脏中实验组的表达量在36h达到峰值;在肾脏中,鳗弧菌和ploy(I:C)处理下g型溶菌酶分别在36h和48h表达量达到峰值。本文通过对大黄鱼两种溶菌酶基因的全长序列的生物信息学分析、组织特异性表达以及鳗弧菌侵染对上述两种溶菌酶基因表达量的影响这三方面的研究得出:1、c型和g型溶菌酶基因的保守性较高;2、健康大黄鱼中两种基因都在肠的表达量高,但效果不同;3、受到细菌侵染后肝脏、肾脏、脾脏中c型溶菌酶基因表达量变化不大,推测该溶菌酶可能主要发挥消化作用;g型溶菌酶基因在肝脏、肾脏、脾脏中表达量都有显著上调,只是最高表达量出现时间不同,说明g型溶菌酶参与了大黄鱼的机体免疫。
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