Dlk1-Dio3印记区间是基因组中重要的印记基因簇之一,位于小鼠的12号染色体的末端。该印记区间为重要的表观遗传调控区,内部存在3个父本表达蛋白编码基因,及多个母本表达的非编码RNA基因,在胚胎发育、细胞增殖分化、血管生成及胎盘发育等各方面起着重要作用。该区间内存在3个父本甲基化的差异甲基化区,分别为Dlk1-DMR、Gtl2-DMR和IG-DMR,以及一个母本甲基化的差异甲基化Meg8-DMR。Meg8-DMR为本实验室新鉴定的一个差异甲基化区,其具体功能不明,因此探究Meg8-DMR在Dlk1-Dio3印记区间的调控作用,对于理解Meg8-DMR的功能显得极为重要。而胎盘作为沟通母体与胎儿之间的桥梁,其发育经常受到印记基因的影响,因此研究Meg8-DMR缺失对胎盘的影响可以作为一个重要指标来探究Meg8-DMR的调控机制。本课题基于课题组前期利用CRISPR/Cas9技术构建的敲除鼠模型,通过合笼繁殖获得E12.5天和E15.5天四种基因型的小鼠胎盘,包括野生型(Meg8-DMR+/+)、父本缺失(Meg8-DMR+/-)、母本缺失(Meg8-DMR-/+)和纯合型(Meg8-DMR-/-)。首先对收集到的胎盘组织进行固定、包埋、切片、HE染色,观察Meg8-DMR敲除后小鼠胎盘的形态学变化。通过统计学分析发现,与野生型相比,E12.5天的父本缺失的胎盘重量偏轻,而E15.5天的纯合组重量偏重,此外Meg8-DMR缺失对胎盘的各层分布和形态没有明显影响。其次提取胎盘组织的RNA,反转录合成其c DNA,采用半定量PCR,q RT-PCR检测Dlk1-Dio3印记区间内各相关印记基因的表达水平,发现Meg8-DMR的缺失会导致附近基因表达的变化,可以看到母本缺失和纯合组的Irm的显著上调。综上所述,Meg8-DMR的缺失会对小鼠的胎盘重量产生一定影响,且存在一定的时间差异性。在分子水平上,Meg8-DMR的缺失并不影响区域内主要印记基因的表达情况,但可以看到邻近的Irm在Meg8-DMR-/+及Meg8-DMR-/-小鼠中表达量显著上调。研究表明Meg8-DMR可能作为Rian的调控区来调控邻近基因的表达量。本研究有助于了解Meg8-DMR在发育过程中的生物学功能,有助于进一步阐明Meg8-DMR的表观遗传调控机制。