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目的研究反复短暂兔骨骼肌生理性缺血产生远隔缺血心肌保护作用即缺血预适应(remote ischemic preconditioning, RIPC)对兔心肌局部缺血／再灌注(ischemia- reperfusion, I/R)损伤的保护作用,以及其保护作用可能的机制。方法构建兔骨骼肌缺血预适应(RIPC)和心肌缺血／再灌注(I/R)模型。本研究分为两部分,第一部分研究：实验分为3组：[①假手术组(Sham组)、②心肌局部缺血／再灌注组(I/R组)、③骨骼肌远隔缺血预适应+心肌局部缺血／再灌注组(RIPC+I/R组)],(各组均为n=6)；第二部分研究：给予兔腹腔注射AMD3100 (CXC细胞趋化因子受体4选择性抑制剂)预处理,探讨骨骼肌远隔缺血预适应对心肌缺血／再灌注损伤的的可能保护机制,实验分为5组：[①假手术组(Sham组)、②心肌局部缺血/再灌注组(I/R组)、③CXCR4选择性抑制剂AMD3100+心肌局部缺血／再灌注组(AMD3100+I/R组)、④骨骼肌远隔缺血预适应+心肌局部缺血/再灌注组(RIPC+I/R组)、⑤CXCR4选择性抑制剂AMD3100+远隔缺血预适应+心肌局部缺血／再灌注组(AMD3100+RIPC+I/R组)],(各组均为n=6)。获取各组兔心脏、外周血和反复短暂性缺血区骨骼肌。应用心脏TTC染色检测心肌梗死面积,Tunel细胞染色检测心肌细胞凋亡,Western blot检测心肌组织促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的表达;留取兔外周血,分别测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factorVEGF)和基质细胞衍生因子-1α(stromal cell derived factor-1, SDF-1α)(用ELISA法测定)；留取反复短暂缺血区骨骼肌及缺血／再灌注的心肌组织,检测缺血区骨骼肌缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1, HIF-1α)、SDF-1α的表达,以及心肌组织中CXC细胞趋化因子受体4(C-X-C-chemokine receptor type 4,CXCR4)的表达(用Western blot和qRT-PCR法)。结果成功构建兔骨骼肌反复缺血预适应(RIPC)和心肌缺血／再灌注(I/R)模型。在第一部分研究中,心脏TTC染色发现：I/R组和RIPC+I/R组心肌梗死面积较Sham组明显增加(P<0.05),但RIPC+I/R组心肌梗死面积小于I/R组(P<0.05);Tunel染色细胞凋亡结果显示：I/R组和RIPC+I/R组心肌细胞凋亡率明显多于于Sham组(P<0.05),但RIPC+I/R组细胞凋亡较I/R组少(P<0.05)。Western blot结果显示：与Sham组比较,I/R组和RIPC+I/R组缺血再灌注心肌组织中凋亡蛋白Bax的表达明显增高(P<0.05),而RIPC+I/R组缺血再灌注心肌组织中凋亡蛋白Bax又较I/R组显著减少(P<0.05)；相反,与Sham组比较,I/R组和RIPC+I/R组缺血再灌注心肌组织中抗凋亡蛋白Bcl-2的明显降低(P<0.05),而RIPC+I/R组缺血再灌注心肌组织中抗凋亡蛋白Bcl-2又较I/R组增高(P<0.05)。为了探讨骨骼肌RIPC保护心肌缺血/再灌注损伤的作用机制,Western blot和qRT-PCR结果显示：与Sham组比较,RIPC+I/R组缺血骨骼肌HIF-1α、SDF-1α的表达明显增高(P<0.01),与I/R组比较,RIPC+I/R组缺血骨骼肌HIF-1α、SDF-1α的表达亦明显增高(P<0.01),此外,I/R组和RIC+I/R组缺血/再灌注损伤心肌组织CXCR4的表达明显高于Sham组(P<0.01);ELISA结果显示：RIPC+I/R组及I/R组外周血中VEGF、SDF-1α水平高于假手术组(P<0.01,P<0.05),且RIPC+I/R组高于单纯心肌I/R组(P<0.05)。在第二部分研究中,给予兔腹腔注射CXCR4选择性抑制剂AMD3100。余步骤同前,测得外周血SDF-1α水平(ELISA法)：I/R组、I/R+AMD组、RIPC+I/R组及AMD+RIPC+I/R组明显高于Sham组(P<0.05),RIPC+I/R组及AMD+RIPC+I/R组升高尤为明显(P<0.01)。而I/R组和I/R+AMD组比及RIPC+I/R组和RIPC+I/R+AMD组相比无差异。心肌梗死面积：TTC染色结果显示,RIPC+I/R组心肌梗死面积小于I/R组(P<0.05)、亦小于I/R+AMD组(P<0.05),小于AMD+RIPC+I/R组(P<0.05)。心肌细胞凋亡率：Tunel染色结果显示,RIPC+I/R组心肌细胞凋亡率小于I/R组(P<0.05)、小于I/R+AMD组(P<0.05),亦小于AMD+RIPC+I/R组(P<0.05)。促凋亡蛋白Bax的表达：Western blot结果显示,RIPC+I/R组心肌组织中低于I/R组及I/R+AMD组(P<0.05),也低于AMD+RIPC+I/R组(P<0.05)；抗凋亡蛋白Bcl-2的表达：Western blot结果显示,RIPC+I/R组心肌组织中高于I/R组、I/R+AMD组(P<0.05),高于AMD+RIPC+I/R组(P<0.05)。结论1.骨骼肌缺血预适应(RIPC)对心肌缺血／再灌注(I/R)损伤有保护作用：减少心肌梗死面积、降低心肌细胞的凋亡；2.骨骼肌RIPC促进缺血骨骼肌HIF-1α的表达,促进VEGF、SDF-1α释放入外周血；3.骨骼肌RIPC促进缺血骨骼肌SDF-1α的表达,心肌缺血／再灌注I/R损伤诱导心肌CXCR4的表达；4. HIF-1α/SDF-1α/CXCR4途径可能是骨骼肌RIPC的心脏保护机制。因此,本研究证明骨骼肌RIPC可通过诱导缺血骨骼肌HIF-1α、SDF-1α表达及促进SDF-1α释放入外周血并趋化携带CXCR4的间充质干细胞到缺血心肌,抑制心肌细胞凋亡及心肌梗死,从而保护心肌缺血／再灌注损伤。目的 研究袖带法肢体生理性缺血训练对冠状动脉慢性完全闭塞病变(chronic total occluded,CTO)患者血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的浓度、缺血心肌灌注及左心室舒张功能的影响,为冠状动CTO患者提供新的临床治疗方法提供理论依据。方法入选我院2014年4月至2015年9月52例冠状动脉CTO病变患者(单支)随机分为训练组(n=26)和对照组(n=26),两组药物治疗的基础相同,对训练组患者训练6个月。训练方法：台式水银血压计测得一侧上肢血压,再将袖带压力置于收缩压上10mmHg,阻断上肢血流,以触摸不到脉搏为准,造成短暂的骨骼肌缺血,持续1分钟,完全放气松开1分钟,如此反复10个循环为一次训练,上下午各一次训练,一周训练5天,共训练6个月。于0月、6月分别检测外周血VEGF的浓度(采用酶联免疫吸附法)、心肌灌注(单光子发射计算机断层显像)、左心室舒张功能(超声心动图)；六分钟步行者步行距离。结果训练组患者6月后血清VEGF浓度由训练前的(83.51±8.33) pl/ml增加到(118.60±9.07) pl/ml,二者比较差异有统计学意义(P<0.01)；对照组VEGF浓度0月(85.98±8.54) pl/ml,6个月后(89.01±10.60) pl/ml,二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。训练组经过6个月的训练SPECT总静息评分由(13.18±1.45)分,改善到(7.34±1.46)分,差异有统计学意义(P<0.01),对照组前后差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者左心室射血分数LVEF(%)无差异,二尖瓣口舒张早期血流速度(E)与二尖变环早期运动速度(E,)比值(E/E)无差异,训练组6个月前后比较(E/E,)明显降低(P<0.05),差异有统计学意义,对照组6个月前后差异无统计学意义(P>0.05)。训练组患者经过6个月的训练六分钟步行试验(6 minutes walk test,6MWT)步行距离由(310.53±6.66)m提高到(347.64±16.93)m,差异有统计学意义(P<0.01),对照组前后比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.袖带法生理性缺血训练促进CTO患者外周血VEGF浓度的增加。2.袖带法生理性缺血训练改善CTO患者缺血心肌灌注及左心室舒张期功能。3.袖带法生理性缺血训练提高CTO患者六六分钟步行距离。