【摘 要】
：
目的:研究EGCG对软骨细胞衰老进程的影响,探讨自噬在EGCG抑制软骨细胞衰老中扮演的角色。方法:（1）取4周龄的SD大鼠后肢关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶分步消化法进行SD大鼠软骨细胞分离培养。（2）分别采用甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学染色对P2代细胞进行细胞染色鉴定并拍照记录。（3）不同浓度EGCG处理IL-1β组的软骨细胞24h后,采用CCK-8法检测经预处理后的软骨细胞存活情况,并计算细胞
论文部分内容阅读
目的:研究EGCG对软骨细胞衰老进程的影响,探讨自噬在EGCG抑制软骨细胞衰老中扮演的角色。方法:（1）取4周龄的SD大鼠后肢关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶分步消化法进行SD大鼠软骨细胞分离培养。（2）分别采用甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学染色对P2代细胞进行细胞染色鉴定并拍照记录。（3）不同浓度EGCG处理IL-1β组的软骨细胞24h后,采用CCK-8法检测经预处理后的软骨细胞存活情况,并计算细胞存活率,确定EGCG实验终浓度。（4）实验分为4组。第一组:空白对照组（Control组）;第二组:10ng/m L IL-1β诱导衰老组（IL-1β组）;第三组:EGCG+10ng/m L IL-1β共培养组（EGCG组）;第四组:EGCG+10ng/m L IL-1β+5m Mol/L 3-MA组（EGCG+3-MA组）。（5）将Control组、IL-1β组和EGCG组软骨细胞分别培养72h后。采用β-半乳糖苷酶染色法检测软骨细胞衰老情况。（6）将Control组、IL-1β组和EGCG组软骨细胞分别培养72h后。采用real-time PCR分别检测各组细胞Ⅱ型胶原蛋白（Col2）、MMP3及MMP13的m RNA表达水平。（7）将以上4组软骨细胞培养72h后。采用Western blot分别检测各组细胞Beclin-1、Col2、MMP3及MMP13的蛋白质表达情况。结果:（1）取自4周龄SD大鼠的原代软骨细胞48小时既有大量细胞贴壁,细胞镜下呈三角形或多角形,胞核清晰,胞质丰富,约3天时间即可贴壁达90%以上。（2）分别对P2代软骨细胞染色,甲苯胺蓝染色细胞浆呈蓝色,细胞核呈深蓝色;Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学染色胞浆呈棕黄色,细胞核呈深棕色。三种鉴定方式均为阳性反应。（3）不同溶度EGCG（6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L）处理软骨细胞24h后,CCK-8结果表明,与Control组相比,IL-1β组细胞活力明显降低。EGCG组与IL-1β组相比,细胞活力明显上升,并确定本实验的EGCG终溶度为100μmol/L。（4）β-半乳糖苷酶染色结果显示Control组可见大量软骨细胞,但均未染色。IL-1β组细胞数较多,基本上都发生了染色反应,呈深蓝色,细胞缩小变圆,失去软骨细胞的基本形态,仅有少量细胞未染色。EGCG组细胞数基本正常,大部分细胞保有软骨细胞正常形态,仅有少部分细胞发生染色反应。（5）Real Time PCR检测表明Col2在Control组、EGCG组m RNA的表达量明显高于IL-1β组。MMP3、MMP13 m RNA在IL-1β组的表达量明显高于Control组、EGCG组。（6）Western blot结果显示Control组、EGCG组的Beclin-1、Col2蛋白表达量较IL-1β组、EGCG+3-MA组明显增高,而MMP3、MMP13的表达量较Control组、EGCG组显著升高。结论:EGCG能有效抑制软骨细胞衰老,并且自噬在EGCG抑制软骨细胞衰老过程中扮演重要角色。
其他文献
目的探究Holter指导下中西医药物结合治疗心率变异超常病人的临床疗效。方法选取2019年5月至2020年12月期间,就诊于我院及余干仁和医院门诊及住院的60例心率变异超常病人,符合:白天心率过快（心率大于100次/分占据大于50%的时间）,夜间心率过慢（平均心率<50次/分,最长RR间期出现2.1-2.9s之间）,根据动态心电图结果来进行中西医药物结合个体化治疗,例如晚上心率慢,使用心宝丸治疗,
目的:本研究旨在调查镇痛浅镇静或无镇静状态下ICU机械通气患者的不适、ICU记忆现状,探讨镇痛浅镇静或无镇静状态下ICU机械通气患者的不适以及ICU记忆的影响因素,分析不适程度与ICU记忆特点的关系,并深入了解镇痛浅镇静ICU机械通气患者的真实体验,以期为医务人员下一步制定精准的ICU患者个体化的舒适护理方案提供依据。方法:1.采用便利抽样法,抽取南昌市及萍乡市2所三级甲等医院的重症监护病房136
目的:制定居家输尿管皮肤造口患者单J管维护清单,探讨维护清单对居家输尿管皮肤造口患者生活质量、自我管理能力、焦虑状态及并发症的影响,并为延续性护理服务拓展新形式。方法:第一阶段,制定维护清单:成立清单研究小组,通过文献回顾,结合前期研究基础,采用头脑风暴法及改良德尔菲法,制定居家输尿管皮肤造口患者单J管维护清单。第二阶段,居家输尿管皮肤造口患者单J管维护清单的应用:本研究采用方便抽样的方法,选取2
目的:将保护动机理论的自我管理教育模式应用于首次PICC置管的血液肿瘤患者中,探究保护动机理论的自我管理教育模式对血液肿瘤患者PICC置管后的自我护理能力、PICC自我管理能力以及PICC相关并发症发生率的影响,以延长血液肿瘤患者PICC导管使用时间,为今后医院形成统一的PICC置管血液肿瘤患者的自我管理教育模式提供借鉴和指导。方法:本研究为类实验性研究,按照纳入排除标准,选取2020年6月至20
目的:评价以护士为主导的早期活动方案在ICU患者中的有效性及安全性,以期为ICU患者开展早期活动提供参考依据。方法:采用1:1随机对照试验设计研究方法,前瞻性纳入2020年6月至2021年2月期间所有在南昌市某三级甲等综合医院重症医学科住院且符合筛选标准的患者作为研究对象,根据随机数字表法将研究对象分为对照组和试验组。对照组予以常规护理,试验组在常规护理基础上联合以护士为主导的早期活动方案。方案干
目的:探讨miR-34a/STAT3/VAMP8调控血小板免疫活化的机制方法:（1）培养人成巨核细胞白血病细胞Meg-01,用1mmol/L双氧水（H2O2）刺激其2小时,模拟血小板氧化应激状态。实验分为2组,control组、H2O2组。q-RT-PCR检测各组细胞中miR-34a的表达水平;Western Blot（WB）检测各组细胞中CD62P、CD40L、PAC-1、VAMP8蛋白表达水平
目的:本研究采用自行编制的帕金森患者支持性服务未满足需求问卷进行现状调查,分析帕金森患者支持性服务未满足需求及其影响因素,为临床制定个性化干预措施提供理论依据。方法:1.通过文献分析初步构建帕金森患者支持性服务未满足需求问卷,专家函询进一步修订问卷,预调查检验信效度。2.抽取江西省三级甲等综合医院的帕金森患者作为调查对象,对患者的一般情况、支持性服务未满足需求、社会支持等方面进行调查。共发放160
未来连锁企业将向各个领域发展,特别是商业零售业态将趋向多样化,我国连锁经营的发展将从零售领域向批发领域、生产领域和服务行业不断发展。连锁零售行业的发展需要大量连锁经营管理人才,而传统连锁经营管理培养人才定位——收银、理货、销售岗位已经不符合当下新零售模式下对人才的要求,为此作为连锁经营管理专业教师应结合实际情况开设店长合作人制度,通过建立高职连锁经营管理专业人才培养"开新零售课、创新基地、养卓越人
目的:研制烧伤患者同伴支持需求问卷,为医护工作者提供科学的烧伤患者同伴支持需求评估工具;并将研制的问卷运用于临床实践,调查并分析烧伤患者对同伴支持的需求内容及影响因素,为临床开展关于烧伤患者的同伴支持计划提供参考依据。方法:1.建立烧伤患者同伴支持需求问卷条目池:经过文献回顾,明确同伴支持在烧伤患者中应用的研究现状及研究不足,结合课题组成员的相关内容讨论,形成烧伤患者半结构访谈提纲。采用目的抽样法
目的:建立基于信息化管理平台的肺康复方案,探讨其对居家行无创通气治疗的COPD患者生活质量、肺功能、呼吸困难程度、运动耐力、自我管理能力、呼吸机治疗依从性的影响,为促进居家行无创通气治疗COPD患者的康复提供依据。方法:选择2019年7月至2020年12月江西省南昌市某三级甲等综合医院呼吸与危重症医学科76例居家行无创通气治疗的COPD出院患者作为研究对象。将患者随机分为观察组与对照组各38例。对