【摘 要】
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该研究建立了一套完整的基因工程大肠杆菌发酵表达（His)-Arg-Arg-人胰岛素原（RRhPI）后经加工成人胰岛素的制备工艺.该工艺具有表达量高,下游分离纯化简单,成本较低等优点.携带有
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该研究建立了一套完整的基因工程大肠杆菌发酵表达（His)<,6>-Arg-Arg-人胰岛素原（RRhPI）后经加工成人胰岛素的制备工艺.该工艺具有表达量高,下游分离纯化简单,成本较低等优点.携带有（His)<,6>-Arg-Arg-人胰岛素原/pQE-40（RRhPI/pQE-40)质粒的大肠杆菌M15经摇瓶培养,目的产物RRhPI以包涵体形式获得了高效表达,每升培养基收获湿菌体约27g,包涵体6g（干重1.8g）,表达水平约为30﹪.该水平已超过现有文献报道的最高水平.裂解菌体,释放表达产物并洗涤纯化之后,用低成本的DEAE-琼脂糖快流速阴离子交换层析初步纯化表达产物,收率达75-80﹪.目前尚未见有关文献报道.将初步纯化的表达产物RRhPI通过Sephadex G-25层析去除变性环境,进行重组复性,恢复天然结构,然后在胰蛋白和羧肽酶B的协同作用下转化为人胰岛素.最后通过Superdex 75分子筛层析,得到了纯度较高的人胰岛素制品.SDS-PAGE分析呈一条蛋白带且与人胰岛素标准品的位置相同.得率为8mg人胰岛素/L培养基.
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