小麦几丁质酶基因的检测及酶活性研究

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几丁质酶(chitinase,EC3.2.1.14)作为一种重要的病程相关蛋白,一直是植物抗菌基因工程的研究热点之一。同时几丁质酶也是一种诱导酶,多种生物和非生物因素均可诱导几丁质酶基因的表达。本文从 NCBI 上已经报道的小麦属几丁质酶Chi1,Chi2,Chi3,Cht2,以及Cht4五个基因序列中分析比较并用Primer软件分别设计了多对引物,对中国小麦微核心种质中随机选取的 94个小麦品种和国内外的260个小麦样品材料进行PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测,并对部分小麦品种进行测序分析;随后对260个品种中的230个样品进行小麦几丁质酶活性测定,并做了低温对照试验,分析低温对小麦几丁质酶活性的影响,最后展望了将几丁质酶基因转入到优质小麦以得到抗病体系的前景,主要结果如下:   (1)在94份小麦材料中,Cht4的引物均扩增出目的片段,Chi3和Cht2也大部分扩增出目的条带,而Chi1和Chi2的第一对引物扩增出的只有37.2%,但第二对引物却大部分都扩增出了目的片段。在260个小麦品种的扩增结果中也大部分呈现这样的趋势,Cht4、Chi3和Cht2的扩增率在85%以上,而Chi1和Chi2的扩增率仍比较低。   虽然每种基因的分布情况不同,但每个小麦品种中至少有一种几丁质酶基因在起作用。   (2)在对8个小麦样品进行测序分析后发现,前面4个品种扩增的片段所编码的蛋白质氨基酸序列与Cht4基因的同源性最高,属于ClassⅣ几丁质酶基因;而后4个样品测出的序列与Chi3基因的同源性最高,均属于第Ⅲ类几丁质酶基因。   (3)酶活性测定结果发现大部分小麦几丁质酶活性在200-600U之间,酶活性均值为421.26U,总体的酶活性比较稳定。低温处理后测定的酶活性均有不同程度的提高,大部分增高范围在0-200U之间,升高倍数在0.16%到1.199倍不等,但总体增高幅度比较小。这说明低温条件可以诱导小麦产生几丁质酶的表达,但是对酶活性的影响不明显。
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