CUEDC2是一个未知功能的蛋白(GeneBank：NM_024040)，在NCBI数据库没有与其功能相关的研究论文。本室其他同学在以往的研究中利用酵母双杂交筛选出CUEDC2与PRB存在相互作用，并且发现CUEDC2能够促进PRB的泛素化降解，为研究CUEDC2的功能提供了线索。 本室其他同学利用CUEDC2作为诱饵进行酵母双杂交筛选中鉴定了多个阳性克隆，其中两个编码IKKβ。为了验证酵母双杂交的结果，以及确定CUEDC2与IKKβ的相互作用区域，首先在GST载体上构建了许多CUEDC2的缺失突变。由于CUEDC2只含有CUE结构域<(1-2)>，因此初步构建了CUEDC2的C末端和N末端以及包含和不包含CUE结构域的突变体。之后为了确定CUEDC2影响NF-κB信号通路的具体区域，又进一步将CUEDC2的各种缺失突变构建到pCDNA3.0-Flag载体上。并构建了IKKβ的一些缺失突变。其次，利用体外的GST pull-down实验验证了CUEDC2与IKKβ之间的相互作用。我们发现CUEDC2与IKKα之间也存在相互作用。随后，利用CUEDC2的缺失突变，通过体外GST pull-down实验确定CUEDC2与IKKα的结合位点在CUEDC2的C末端。 由于IKK是NF-κ B信号通路中非常重要的蛋白<(3-13)>推测UCUEDC2会影响NF-κB的转录活性。为确定CUEDC2和IKKα/β相互作用的生物学意义，在真核细胞中建立了一套NF-κB转录激活荧光素酶报告检测系统。测活结果发现，过表达CUEDC2可以特异地抑制TNFα刺激的NF-κB转录活性。这一现象在Hela细胞中得到了验证。用IL-1β刺激HEK293细胞，发现CUEDC2也能够抑制IL-1β刺激的NF-κB转录活性。在稳定转染CUEDC2的HEK293细胞中，我们发现TNFα和IL-1β对NF-κB的转录激活相比空载体组明显降低。为了确定CUEDC2在哪个水平抑制NF-κB信号通路，我们在293T细胞中共转CUEDC2与NF-κB信号通路的许多成员如MEKK1，IKKβ，持续激活型IKKβ，p65<(14-16)>，通过此实验确定CUEDC2抑制NF-κB转录活性是在IKK水平。