论文部分内容阅读
目的: 研究银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)对高糖培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)凋亡的保护作用及其可能的分子机理。
方法: 人晶状体上皮细胞B3细胞系用DMEM低糖培养基(葡萄糖终浓度5.56mmol/L)培养,将培养的细胞分为正常对照组(NS组,葡萄糖终浓度5.56 mmol/L)、高糖组(HG组,葡萄糖终浓度50 mmol/L)、GBE低浓度组(GL组,10μg/mlGBE-DMEM高糖培养液),GBE中浓度组(GM组,20μg/ml GBE-DMEM高糖培养液),GBE高浓度组(GH组,40μg/ml GBE-DMEM高糖培养液),苄达赖氨酸(bendazac lysine,BDL)对照组(BDL组,0.5μmol/L BDL-DMEM高糖培养液)。用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法测定HLECs的活力;流式细胞术测定HLECs的凋亡百分率;Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞核的形态学变化;可见光分光光度法测定胞浆过氧化氢酶(catalase,CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px),总抗氧化能力(total antioxidativecapability,T-AOC)和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)四大抗氧化指标的水平、醛糖还原酶(aldose reductase,AR)及半胱氨酸基天冬氨酸-特异性蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)活性的变化;免疫印迹法测定胞浆内Bcl-2和Bax的表达。
结果: 与低糖对照组相比,高糖组的HLECs活力明显降低,细胞凋亡百分率明显升高(P<0.01),较多细胞出现典型的凋亡细胞核的形态学改变。与高糖组相比,GBE低中高浓度组的HLECs活力增强,细胞凋亡百分率显著降低且随GBE浓度增加作用更明显(P<0.01),典型的凋亡细胞核也逐渐减少;GM组和GH组的CAT,GSH-Px,T-AOC和T-SOD的水平显著提高(P<0.05 or P<0.01),而GL组和BDL组仪提高T-AOC,GSH-Px的水平,对CAT、T-SOD无明显作用。GBE还能明显降低AR的活性(P<0.01);与高糖组相比,GBE低中高浓度组Bcl-2的表达增加,Bax的表达降低,Bax/Bcl-2的比值明显降低(P<0.01),caspase-3的活性显著降低(P<0.01),且均随药物浓度增加作用增强;BDL组的Bax/Bcl-2的比例和caspase-3的活性也有降低(P<0.05 or P<0.01)。
结论: 高糖能诱发HLECs凋亡,对细胞产生损伤作用;GBE能明显抑制高糖诱导的HLECs凋亡并对细胞有保护作用;GBE有很强的抗氧化能力和抑制AR的作用,并能明显降低Bax/Bcl-2的比值,抑制caspase-3的活化。由此可见GBE通过其抗氧化作用、降低caspase-3和AR的活性,降低Bax/Bcl-2的比值共同抑制了氧化应激所致的线粒体凋亡通路异常所致的HLECs凋亡,这对于延缓糖尿病白内障的发生和发展有重要意义。