目的：　　 近年来，贲门癌的发病率呈明显上升趋势。目前的证据表明贲门癌具有其独特的流行病学趋势、生物学行为和临床特点，表现为病期较晚，侵袭范围广，恶性程度高，预后不良。这提示贲门癌可能是一种相对独立的临床疾病，具有其独特的发病机制。　　 c-Met是肝细胞生长因子HGF的高亲和性膜受体，其基因定位于染色体7q31，可识别并结合HGF。c-Met广泛地表达于人体各种正常组织，但在多种肿瘤组织中呈现出异常的高表达、突变或活性改变。c-Met与胃癌的关系密切，在胃癌细胞中存在c-Met的表达。胃癌组织中c-Met的过度表达与胃癌进展有关。在胃黏膜细胞癌变过程中，c-Met癌基因蛋白过量表达出现很早，提示胃黏膜病变细胞处在高度增殖状态，并具有恶变潜能，故c-Met被认为是与胃癌相关的特异性基因。但是c-Met基因与贲门癌的关系并不明确，目前并没有研究表明c-Met与贲门癌的发生发展有明确关系。　　 整合素是一组细胞表面的黏附分子，是多种基质蛋白的膜受体，其可以参与细胞的信号传导，调控基因表达、细胞周期和细胞凋亡。肿瘤基因学研究中已证实整合素与多种癌症的发病、侵袭以及转移相关。在胃癌中，整合素同样出现高表达，并与胃癌的浸润性、低分化趋向和转移等恶性表型密切相关。　　 c-Met与整合素都属于肿瘤细胞表面重要的跨膜受体，可独立介导与肿瘤侵袭和转移有关的信号转导。近年越来越多的研究表明，c-Met与整合素信号系统在肿瘤细胞表面，下游信号以及两者表达水平上存在精密的相互调控。整合素与c-Met之间的相互作用包括直接结合，通过FAP(胞内募集黏附斑，focal adhersionplaques)的相互作用，并在表达上有相互影响。对这种交互作用的认识，将有助于进一步加深对肿瘤侵袭和转移的认识。　　 为了更加深入地了解贲门癌的分子生物学特征，揭示贲门癌的发病机制，本研究利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)，Western blot和免疫组织化学方法检测贲门癌组织中c-Met和整合素αsβ1的表达，探讨其与贲门癌临床病理因素的关系及二者的相关性。　　 材料与方法：　　 一、实验材料　　 收集自辽宁省肿瘤医院及辽宁省人民医院2006年10月到2007年10月间的贲门腺癌组织标本45例。取距癌灶5cm以上的正常胃黏膜组织作对照。另收集自辽宁省肿瘤医院及辽宁省人民医院2004年1月-2007年5月间经手术及病理证实为腺癌且保存完好的贲门癌组织蜡块102例，同期选取正常胃黏膜组织蜡块36例做对照。所有患者术前未经化疗或放疗，病灶均为单发。　　 二、实验方法　　 1、RT-PCR检测　　 组织匀浆后以TRIzol试剂提取细胞总RNA，通过逆转录反应将其转化为cDNA；以cDNA为模板，在反应体系中加入c-Met或整合素αs及β1引物，以β-actin为内对照，进行PCR扩增；PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳后分析图像，计算目的基因相对表达量。　　 2、Western blot检测　　 组织加入裂解液，匀浆后离心，取上清检测蛋白浓度，并将各样本蛋白浓度调整一致。每孔加样50μg，行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳后在转印槽中转膜，将硝酸纤维素膜封闭，加入c-Met或内对照β-actin兔抗人多克隆抗体，4℃孵育过夜。次日将膜置于碱性磷酸酶标记的羊抗兔IgG(二抗)中，室温孵育2h，洗膜5min×3次，碱性磷酸酶显色液(AP)显色5min，沥干膜，扫描成像。以Scn image软件分析图像，计算目的蛋白相对表达量。　　 3、免疫组织化学方法检测c-Met和整合素α5β1蛋白的表达情况　　 SP法检测贲门癌组织蜡块标本102例，同期选取正常胃黏膜组织蜡块36例作对照。标本蜡块取自病理科，癌灶和癌旁正常组织分别作连续切片，厚4μm。兔抗人整合素αsβ1多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司。　　 结果　　 1、c-Met在贲门癌组织中的表达　　 c-Met蛋白及c-Met mRNA在贲门癌组织中表达水平高于癌旁正常组织，二者相比具有统计学差异(P<0.01)。贲门癌组织中，c-Met的表达与癌组织浸润深度、分化程度、淋巴结转移及PTNM分期有关，而与患者年龄、性别和肿瘤大小无关。浸润深度越深c-Met表达越高：淋巴结转移组c-Met基因蛋白表达显著高于无淋巴结转移组；高中分化组c-Met基因蛋白表达低于低分化组；Ⅰ-Ⅱ期组c-Met基因蛋白表达低于Ⅲ-Ⅳ组。　　 2、整合素α5β1在贲门癌组织中的表达　　 贲门癌组织中整合素α5β1 mRNA的表达与癌旁正常胃黏膜组织α5β1 mRNA的表达具有统计学差异(P<0.01)。在贲门癌组织中，整合素α5β1的表达与癌组织淋巴结转移及病理分期呈正相关，与癌组织分化程度负相关，而与患者年龄、性别、肿瘤大小及浸润深度无关。本实验研究结果表明，贲门癌组织中整合素α5β1的表达显著高于癌旁正常胃黏膜组织，组织分化程度低、伴淋巴结转移的及临床分期较晚(Ⅲ、Ⅳ期)的贲门癌组织中，整合素α5β1的表达分别高于组织分化程度高、不伴淋巴结转移以及临床分期较早(Ⅰ、Ⅱ期)者，差异有统计学意义。　　 3、免疫组化分析c-Met和整合素α5β1的表达　　 贲门癌组织中c-Met和整合素α5β1随组织浸润深度的加深、淋巴结转移，阳性表达率有升高趋势，并具有统计学意义；且与组织分化程度负相关。c-Met和整合素α5β1二者的关系经相关性检验得出，列联系数r=0.938，表明两者高度相关。　　 结论：　　 c-Met和整合素α5β1在贲门癌组织中高表达，显著高于癌旁正常胃黏膜组织，有望成为贲门癌诊断、预后判断和基因治疗的新靶点。c-Met和整合素α5β1蛋白的表达与贲门癌组织浸润深度、淋巴结转移、病理分期呈正相关，与癌组织分化程度呈负相关，而与患者年龄、性别和肿瘤大小无关。　　 c-Met和整合素α5β1在贲门癌组织中的高表达有显著的相关性。　　 c-Met和整合素α5β1基因的异常在贲门癌的发生发展过程中可能起重要作用。　　 联合检测二者在贲门癌中的表达可能有助于预测贲门癌患者的预后。