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研究目的:口腔鳞状细胞癌被世界卫生组织提为,世界排名第六的恶性肿瘤,作为易发肿瘤,因侵袭性强、转移率高的特点,导致其患者预后极差甚至危及生命。近年来,对于侵入邻近组织、发生转移的口腔鳞状细胞癌患者的死亡率尚无显著改善[1]。所以亟需进一步研究口腔鳞状细胞癌侵袭和转移的机制,以延长患者的生存期。肿瘤相关巨噬细胞作为肿瘤微环境中的主要免疫细胞亚群之一,在肿瘤微环境中主要极化为两种表型,M1型和M2型。其中M2型肿瘤相关巨噬细胞可以促进肿瘤的侵袭和转移,另外,肿瘤相关巨噬细胞通过分泌多种细胞因子,如IL-6、IL-10、IL-12等也可以影响肿瘤的生长、侵袭和转移[2]。研究表明ENO1是糖酵解过程中的一种α-烯醇化酶,是催化糖酵解途径中2-磷酸甘油酸转化为磷酸烯醇丙酮酸的金属酶。它是一种多功能糖酵解酶,参与各种重要的生理过程,如细胞应激、癌症的发生和转移[3]。研究发现ENO1在口腔鳞状细胞癌组织和细胞上高表达,并且可以通过糖酵解产生的ATP促进肿瘤的侵袭转移,抑制肿瘤的进一步发展,但ENO1在口腔鳞状细胞癌的具体机制尚未完全阐明[4]。本研究课题目的是探讨肿瘤细胞产生的ENO1对肿瘤相关巨噬细胞分泌细胞因子的调控,在口腔鳞状细胞癌中侵袭和转移的作用。进一步阐明口腔鳞状细胞癌侵袭转移的机制,有助于寻找更为有效的靶点,对提高口腔鳞状细胞癌的治疗效果具有重要意义。研究方法:以人的CAL27细胞、小鼠的RAW264.7细胞为实验研究对象,Real-time PCR以及Western blot检测ENO1的siRNA在CAL27细胞的转染效率;使用Transwell小室实验检测ENO1的表达对CAL27细胞的侵袭转移的影响情况;Real-time PCR检测ENO1对TAMs产生细胞因子IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α、TGF-β的分泌影响;使用Transwell小室实验检测IL-6R抑制剂对CAL27细胞的侵袭和转移的影响。研究结果1.ENO1的siRNA在CAL27细胞上的转染效率与正常CAL27细胞组和NC组相比较,三种ENO1的siRNA转染后,Real-time PCR和Western blot结果显示:ENO1的siRNA转染CAL27细胞36h后,在基因水平上,与control组和NC组相比,siRNA1（1070）、siRNA2（1197）、siRNA3（1353）的ENO1表达量均下降约60%;ENO1的siRNA转染CAL27细胞48h后,在蛋白水平上,与control组和NC组相比,siRNA1（1070）、siRNA2（1197）、siRNA3（1353）的ENO1表达量约下降为40%、30%。siRNA1（1070）的转染效率更明显。2.ENO1对肿瘤细胞侵袭和转移影响Transwell小室实验结果显示:与NC组相比,ENO1的siRNA转染CAL27细胞后可以显著降低CAL27细胞的侵袭和转移能力;与control组相比,加入外源性重组ENO1蛋白可以显著增强CAL27细胞的侵袭和转移能力。3.ENO1对TAMs分泌的细胞因子的影响用相同生长密度的CAL27细胞上清作用于RAW264.7的24h后,诱导成TAMs,再用Control、ENO1、NC、siRNA四组不同条件的CAL27细胞上清分别作用TAMs细胞6h、12h后,Real-time PCR分别检测6h、12h的IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α、TGF-β五种因子的基因表达水平,与NC组相比,siRNA降低ENO1的表达能显著减少IL-6的分泌;与control组相比,外源性重组ENO1蛋白升高ENO1的表达能显著增加IL-6的分泌。4.TAMs分泌的细胞因子对肿瘤细胞的侵袭转移的影响Transwell小室实验结果显示:与对照组相比,IL-6R抑制剂加入后,能显著抑制CAL27细胞的侵袭转移。研究结论1.肿瘤细胞产生的ENO1促进OSCC细胞的侵袭和转移;2.肿瘤细胞产生的ENO1的表达能够促进TAMs的IL-6的分泌;3.TAMs的IL-6的分泌可以促进OSCC细胞的侵袭和转移。