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目的1.明确骨形态发生蛋白-15(Bone Morphogenetic Protein-15 BMP-15)在子宫内膜异位症患者和单纯男性重度少弱精不孕或者单纯输卵管梗阻无超声下可见积水患者中表达量的差异,以及BMP-15对卵母细胞质量的影响以及在不孕症中所起的作用。2.子宫内膜异位症患者卵母细胞的卵丘颗粒细胞凋亡率对卵母细胞质量的影响及其作用途径。方法1.选取2009年6月至2010年11月于浙江大学医学院附属邵逸夫医院生殖中心就诊的不孕患者,经腹腔镜检查或卵巢囊肿穿刺术确诊为子宫内膜异位症的85例患者纳入内异症组,单纯男性重度少弱精不孕或者单纯输卵管梗阻无超声下可见积水的88例患者为对照组。2.临床所有入选患者均记录年龄、获卵数、正常受精数、正常卵裂数、优胚数,并随访临床妊娠情况。3.取卵时收集入选患者不含血的卵泡液于EP管中,离心去除细胞等有形成分,采用Western blot方法测定内异症组和对照组患者卵泡液中BMP-15的表达量。4.留取取卵日剥除的成熟卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞于EP管中,离心弃上清；加入透明质酸酶处理颗粒细胞后,FITC及PI双染色颗粒细胞；避光处理后,采用流式细胞仪分析两组患者卵丘颗粒细胞的凋亡率。5.留取取卵日剥除的成熟卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞于EP管中,离心弃上清,将颗粒细胞保存于-80℃冰箱内,待实验日解冻所有颗粒细胞,采用Trizol(?)去分别提取每例标本的总RNA,逆转录成cDNA,采用Real time PCR(?)去检测颗粒细胞糖代谢基因PFKP mRNA及LDHA mRNA的表达量。结果内异症患者85例,平均获卵数(8.2±5.6)个,优胚率(37.6±33.2)%,而对照组患者88例,平均获卵数及优胚率分别为(11.94±5.8)个, (48.0±31.4)%,内异症组患者平均临床获卵数及优胚率均较对照组低,两者具有统计学差异性(P<0.05)。内异症组获卵率、受精率及卵裂率分别为(72.4±28.3)％、(65.3±24.7)％、(98.8±5.7)％;对照组获卵率、受精率及卵裂率分别为(73.4±22.9)％、(67.4±21.0)％、(99.4±5.4)％,两组患者获卵率、受精率及卵裂率差异无显著性(P>0.05).85例内异症组患者中有33例获得临床妊娠,临床妊娠率为38.8%；88例对照组中未受精有2例,4例因OHSS取消移植,1例因子宫内膜息肉取消移植,1例因子宫肌瘤取消移植,1例因内膜薄取消移植,4例因孕酮升高未移植。剩余75例患者中有40例获得临床妊娠,临床妊娠率为53.5%。内异组患者临床妊娠率较对照组低14.7%,但差异无显著性(P=0.067)。采用western-blot法检测卵泡液中BMP-15的表达量,13例内异症组患者卵泡液中BMP-15表达量(0.67±0.18),13例对照组患者卵泡液中BMP-15表达量为(0.944±0.33),内异症组较对照组低,两者相比具有统计学差异性(P<0.05)。流式细胞仪分析6例内异组患者卵丘颗粒细胞早期凋亡率为(37.82±15.81)%,6例对照组患者卵丘颗粒细胞早期凋亡率为(8.85±5.58)％,两者差异具有统计学差异性(P<0.05)。15例内异症组患者颗粒细胞PFKP mRNA的相对量为(1.22±0.63),LDHA mRNA的相对量为(1.22±0.60),12例对照组患者颗粒细胞PFKP mRNA的相对量为(0.96±0.19),LDHA mRNA的表相对量为(0.97±0.29),内异症组患者颗粒细胞PFKP mRNA的相对量和LDHA mRNA的相对量均较对照组高,但两者之间差异无显著性(P>0.05)。结论内异症患者卵泡液中BMP 15表达量降低,卵丘颗粒细胞的凋亡率升高,可能是由于内异症患者卵母细胞分泌BMP 15减少影响颗粒细胞的增殖及其糖酵解,因此颗粒细胞凋亡率增加,从而影响卵母细胞质量、卵泡的发育以及胚胎的正常生长,致使临床妊娠率降低。