目的:盐酸奈必洛尔(Nebivolol hydrochloride,NBH)作为美国Johnson and Johnson公司研发的新型第三代β-受体阻滞剂,主要用于轻、中度高血压的治疗,也可用于充血性心衰和心绞痛等病症[1]。NBH不仅对β1受体选择性强,而且还能够通过精氨酸-NO通道的调节而发挥扩血管的作用。目前,盐酸奈必洛尔已上市的剂型为普通片剂,部分患者口服时生物利用度较低,对于强代谢型患者,其生物利用度仅为12%[2],可能与其肝脏首过效应及溶解度差有关。为提高盐酸奈必洛尔的生物利用度,本课题在采用环糊精包合技术改善药物水溶性的基础上,通过研制新型口腔黏膜给药缓释制剂—口腔黏附双层片,以期避开肝脏的首过作用,延缓药物在口腔黏膜的滞留时间,提高生物利用度,减少个体差异。方法:(1)盐酸奈必洛尔处方前研究:采用HPLC法测定盐酸奈必洛尔溶液的含量,采用饱和水溶液法测定盐酸奈必洛尔在纯水、0.1mol·L-1盐酸溶液及pH2.0、pH6.8、pH7.4、pH8.0磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度;通过摇瓶法测定盐酸奈必洛尔在正辛醇-水/缓冲液体系中的表观油水分配系数(Log P);通过原料药的影响因素实验,考察了盐酸奈必洛尔的吸湿性以及供试品在高温(60℃)、高湿(RH=75%±5)、强光(4500lx±500)破坏条件下的稳定性。(2)盐酸奈必洛尔-HP-β-CD包合物的制备与表征:以溶液搅拌-冷冻干燥法制备包合物;采用L9(34)正交实验设计,以盐酸奈必洛尔-HP-β-CD投料比(摩尔比)、包合温度、包合时间、乙醇浓度为考察因素,以包封率为指标筛选最佳工艺;通过相溶解度法、红外吸收光谱法、X-射线粉末衍射法、核磁共振法对包合物进行验证;运用HPLC方法测定盐酸奈必洛尔-HP-β-CD包合物的包封率和载药量。最后,运用饱和水溶液法分别测定盐酸奈必洛尔和包合物在纯水、pH6.8磷酸盐缓冲液中的溶解度,以考察包合物的增溶性能。(3)包合物口腔黏附双层片的制备和处方优化:本研究采用粉末直接压片法制备内层片,为减少异物感对患者带来的不适,拟将其制成直径为6mm,片重约为60mg的口腔黏附双层片。首先通过单因素实验,以黏附剂的种类、黏附剂的用量和比例以及黏膜促渗剂的用量为考察对象,以体外黏附力、体外累计释放度和体外溶胀率为考察指标,筛选内层片处方。然后根据单因素实验结果,确定黏附剂种类,并选择对黏附力和释放度影响较大的两个因素,每个因素设置5个水平,采用中心组合设计-效应面法安排实验,优化处方工艺。(4)包合物口腔黏附双层片的质量评价:建立hplc法作为本制剂的含量测定方法,并进行系列方法学验证。依据《中国药典》四部制剂通则(2015版),分别对本品性状和含量均匀度进行药剂学表征;根据力矩平衡原理,采用自制装置对口腔黏附片的体外黏附力进行测定;运用紫外分光光度法建立体外释放度测定方法,并对其释药曲线进行零级、一级、higuich、ritger-peppas方程拟合,以拟合优度最大,确定最佳拟合模型,推测其释药特性。结果:(1)通过对盐酸奈必洛尔进行处方前研究,结果表明:在37±0.5℃下,盐酸奈必洛尔在纯水中和0.1mol·l-1盐酸的平衡溶解度分别为722.53μg·ml-1和56.07μg·ml-1,在正辛醇-水/盐酸体系中的油水分配系数分别为1.17和1.32。盐酸奈必洛尔的平衡溶解度和油水分配系数对ph变化呈现出依赖性。在ph2.0~ph7.4的范围内,随着ph的升高,nbh的平衡溶解度降低,表观油水分配系数增加;而当ph从7.4增加至8.0时,平衡溶解度增加,油水分配系数降低;盐酸奈必洛尔在相对湿度75%±5的条件下,其平均增重百分率为2.67%,根据“引湿性特征与引湿性增重”的界定,nbh属于有引湿性的药物;影响因素实验结果表明,盐酸奈必洛尔在高温条件下较稳定,强光和高湿条件下,药物含量有所降低,有关物质基本无变化,提示盐酸奈必洛尔原料药及其制剂在生产、运输和贮存过程中,应阴凉、干燥处保存,以保证药物的安全、稳定、有效。(2)盐酸奈必洛尔-hp-β-cd最佳包合工艺为:主客分子投料比(摩尔比)1:1,包合温度40℃,磁力搅拌时间4h,乙醇浓度80%;包合物验证结果表明,盐酸奈必洛尔、物理混合物与包合物的图谱之间存在显著差别,盐酸奈必洛尔-hp-β-cd包合物形成,相溶解度图呈al型,且包合比为1:1;包合物经hplc测定后,包封率为(73.69±0.10)%,载药量为(16.70±0.22)%,与理论值基本吻合,工艺重现性良好;盐酸奈必洛尔和包合物增溶效应研究结果表明,药物经包合后,其溶解度在纯水和ph6.8磷酸盐缓冲液中分别增大了3.18倍和11.10倍。(3)由单因素实验结果可知,选择黏附力较大、膨胀率适中的cp和hpmc联合作为生物黏附材料,以cp和hpmc总量为a因素,cp和hpmc比例为b因素,各因素的取值范围分别为:5%~25%和0.20:1~1:1,进行效应面法优化。最终,优化得到的内层片处方为:包合物占处方总量的50%(相当于盐酸奈必洛尔5mg),cp和hpmc占处方总量的11.45%,二者比例为0.32:1,填充剂甘露醇占处方总量的37.15%,硬脂酸镁和微粉硅胶分别占处方总量的0.8%和0.6%,保护层一侧涂以10%的乙基纤维素乙醇溶液,自然干燥后即得。(4)对自制的包合物口腔黏附片进行相关药剂学评价,结果如下:本品为内层白色或类白色,外层一侧覆透明薄膜,表面光滑的双层片。含量均匀度结果表明,a+1.80s均小于15.0,符合药典的规定。三批样品的黏附力适中,符合口腔黏附制剂的规定。本制剂在8h内的释药曲线与ritger-peppas方程具有最佳拟合度,lnq=0.5649lnt-1.3442,r2=0.9776,推测其释放机制为non-fick扩散,即药物释放是由于药物扩散和骨架溶蚀的共同作用。方法学验证结果表明,用高效液相法作为本品含量测定方法,精密度、回收率高,线性、稳定性好,快速、简便的优点。结论:本研究应用溶液搅拌-冷冻干燥法制备包合物,工艺先进,合理可行,制备的包合物包封率高,既解决了盐酸奈必洛尔的溶解度问题,又得到了性状疏松的固体粉末,可为进一步研究打下基础。以包合物为压片主药,CP和HPMC联合作为生物黏附材料,采用直接压片法制备用于口腔黏膜给药的盐酸奈必洛尔双层片,制备工艺简便、可行,可以满足单向释药的要求。药物经口腔黏膜给药,既可避免胃肠液中酶、酸的影响及肝首过效应,又能提高药物的生物利用度,可为为盐酸奈必洛尔新剂型的研究开发提供有益参考。通过系列方法学验证表明HPLC法作为本品的含量测定方法具有回收率高,专属性强,线性、精密度、重复性好等优点。质量评价结果表明,本制剂主要性能指标均符合药典规定。体外实验研究结果表明,体外释放度和体外黏附力的测定方法科学、简便,黏附力理想和释药速率适宜,符合口腔黏附制剂的相关规定。