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神经降压肽(neurotensin,NT)是含有13个氨基酸残基的脑肠肽,广泛分布于哺乳动物中枢和外周神经系统以及胃肠道内,参与了众多的生物效应。在中枢神经系统中研究较多的是其对痛觉的调制作用。其中脊髓水平的神经降压肽主要来源于脊髓固有神经元内,具有明显的镇痛作用,并推测该镇痛作用是由其高亲和力受体( NTR1)或低亲和力受体(NTR2)介导的。已证实,脊髓前角和后角都含有神经降压肽,对后角神经降压肽的分布已有了较详细的报道,而对其在前角的分布却知之甚少。另外,参与痛觉调制的神经降压肽具体来自于脊髓的何种神经元亦不明确。本研究首先应用形态学方法观察了脊髓前角内神经降压肽的分布特点,再利用慢性压迫性坐骨神经痛模型观察脊髓前角和后角的神经降压肽在神经病理痛条件下有何变化,从而初步探讨了脊髓水平神经降压肽在痛觉调制中可能的机制。一.脊髓前角神经降压肽的分布本研究首先利用经典的尼氏染色法和标记乙酰胆碱酯酶的Karnovsky-Roots法来显示脊髓前角的运动神经元,再利用免疫组织化学技术应用神经降压肽抗体观察脊髓前角内神经降压肽免疫阳性神经元的分布特点,通过对二者的比较,结果发现:脊髓前角神经降压肽免疫阳性细胞可分为大、小两种。其中大细胞主要分布在前角前外侧(第Ⅸ层),多为多极神经元或双极神经元,与尼氏染色和乙酰胆碱酯酶显色显示的脊髓前角运动神经元具有明显的一致性,可认为该类阳性细胞可能为运动神经元(包括α和γ神经元);小阳性细胞则散在分布于前角各个区域,除可能为调节性中间神经元外,尚不能推测该类阳性细胞为何种神经元。二.慢性压迫性坐骨神经痛模型的制备成年雄性SD大鼠随机分为模型组、假手术组和正常组。其中模型组大鼠通过5-0铬制羊肠线结扎单侧坐骨神经建立慢性压迫性坐骨神经痛模型,假手术组大鼠处理除未结扎神经外同模型组,正常组大鼠未做任何处理。采用意大利产UGO-BASILE 37300型辐射热测痛仪,以大鼠术侧后足抬腿潜伏期为其痛阈反映值,连续监测其痛阈及行为变化。结果发现:模型组大鼠术后第一天即开始出现术侧自发抬足、舔足以及不敢持重等自发性疼痛和感觉异常现象,痛阈亦随之降低, 5-7天达到高峰,伴有足趾屈曲内翻等畸形,安静时卧于健侧,至13-14天上述现象逐渐消失,但足趾屈曲内翻以及跛行等畸形无明显恢复。假手术组大鼠无上述典型现象出现。三组大鼠偶有轻微自嗜症状。三.神经病理痛条件下脊髓水平神经降压肽含量上调正常状态下在脊髓水平给予外源性神经降压肽具有明显的镇痛效应。为探讨神经病理痛条件下脊髓水平内源性神经降压肽是否上调,本研究利用神经病理痛模型,应用免疫组织化学技术等形态学方法以及监测大鼠痛阈等行为学手段,分别在大鼠痛阈最低期(第七天)和恢复期(第十四天)观察模型组、假手术组和正常组大鼠脊髓腰膨大处神经降压肽的含量变化。结果发现:1.在前角前外侧(含第Ⅸ层),模型组大型神经降压肽免疫阳性细胞数和阳性面积无论在第7天还是在第14天都与假手术组和正常组之间没有显著性差异,即在痛阈最低期和痛阈恢复期都没有明显变化;与其同一视野的小型阳性细胞,其细胞个数无论在第7天还是在第14天都与假手术和正常组之间有显著性差异(P<0.01)即在痛阈最低期明显增多,至恢复期有所减少,但均高于假手术和正常组;在前角内侧(约在第Ⅷ层内),小型阳性细胞的细胞个数在第7天与假手术组和正常组之间有显著性差异(P<0.01),但在第14天三组之间没有显著性差异,即在痛阈最低期前角内侧小阳性细胞也明显增多,至恢复期降到正常组水平。在脊髓其他部位(包括后角)小型阳性细胞的数量在三组之间没有显著性差异。2.模型组大鼠在第7天其脊髓后角胶状质(SG)内的神经降压肽含量显著升高,呈明显的眉毛状结构,而在恢复期神经降压肽含量下降,眉毛状结构随之消失。在假手术组大鼠和正常组大鼠没有观察到这一现象。综上所述,本研究在核团水平和细胞水平观察了神经降压肽在脊髓前角的分布,初步认为脊髓前角运动神经元内(包括α和γ神经元)含有神经降压肽,另外神经降压肽还存在于前角某些调制性中间神经元内。神经病理痛条件下,脊髓后角胶状质内神经降压肽含量升高,同时前角含有神经降压肽的中间神经元数量上调,二者在形态学和行为学上具有一致性,因此可推断脊髓水平的神经降压肽在后角胶状质内参与了痛觉的调制,而该神经降压肽可能主要来自脊髓前角某些中间神经元内。