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研究包括以下两个部分:一、脐带血干细胞的体外分离、培养及鉴定目的主要采用密度梯度离心法结合直接贴壁法分离人脐带血中的干细胞,并在体外给予原代及传代培养,同时观察细胞形态,鉴定其增殖能力及是否表达神经干细胞特异性抗原。方法参照文献[1]的方法,利用干细胞分离液得到脐血干细胞,将其在体外应用DMEM/F12培养基进行原代及传代培养,采用免疫荧光细胞化学染色方法观察细胞形态、鉴定细胞增殖能力及是否表达神经干细胞表面抗原。结果脐血干细胞原代及传代培养,克隆球中含有表达神经巢蛋白(Nestin)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的阳性细胞,经多次传代培养后,脐血干细胞可稳定增殖,均有一定比例表达Nestin特异性抗原阳性的细胞,且比例无明显变化。结论实验证实人脐血干细胞中可分离培养出神经干细胞,反复传代后部分细胞表达NSE,具有自我更新和增殖的能力,并具有多向分化潜能,从而为临床神经系统疾病的治疗奠定了坚实的基础。二、脐血干细胞移植治疗脑出血后遗症的疗效分析目的本课题主要从脑细胞再生角度入手,以国内外关于脐带血干细胞体外诱导、分化成神经干细胞及其在哺乳类动物体内迁移再生等理论研究为基础,着重研究脐带血干细胞移植到脑出血后遗症患者蛛网膜下腔,通过神经功能恢复及脑脊液中细胞生长因子的改变,客观评价其对脑出血后遗症的治疗疗效,从而为脑出血的治疗探讨新的途径。方法60人随机分为两组:治疗组:将分离出来的脐带血干细胞经腰椎穿刺部位注入患者蛛网膜下腔,同时给予适当脱水及神经营养药物等对症治疗。对照组:除了未给予干细胞移植治疗外,余治疗同治疗组。两组于治疗后3、6、9个月神经功能采用斯堪的纳维亚卒中量表(Scandinavian Stroke Scale, SSS)进行评分;治疗前和治疗后1、2、3周分别行脑脊液细胞生长因子检测。结果1.治疗组与对照组在治疗前及治疗后3、6、9个月采用SSS进行评分,结果显示治疗组明显高于对照组,P<0.05差异有统计学意义。2.脐血干细胞移植组治疗后脑脊液细胞生长因子显著增加,P<0.05差异有统计学意义。结论脐血干细胞移植治疗脑出血后遗症取得了一定的疗效,为神经系统疾病的治疗带来了新的曙光。