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背景1939年发现了Rh血型系统,随后的临床研究证明该系统抗原抗体不匹配能引起溶血性输血反应、新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血等疾病。Rh血型系统是人类30个红细胞血型系统中最复杂最富有多态性的一个系统,其临床重要性仅次于ABO血型系统。RH基因存在丰富的人种和民族遗传差异,这种遗传背景差异在东方人中尤为复杂,RH基因不仅在编码区存在多态性,而且在非编码区也富有多态性。RH基因由位于1p34.3—lp36.1上的2个同源性高达96%以上的RHD和RHCE基因组成。RHD基因编码RhD多肽,RHCE基因编码RhC/c和RhE/e多肽。RHC与RHc等位基因相比,仅有6个核苷酸不同,分别是位于48、150、178、201、203和307位的核苷酸,在这些位置上RHC等位基因分别是C、T、A、G、G和T,而RHc等位基因则分别是G、C、C、A、A和C。其中唯有由307位碱基编码的103位脯氨酸位于细胞膜外,是决定Rhc抗原性的关键位置,也是决定RHc基因分型特异性的关键位点。据报道白种人中带有Rhc抗原个体其RHCE基因外显子(exon)2的307位100%都是C,国内外的研究证明,针对此位点设计特异性检测引物检测RHc等位基因结果均正确。然而,国外研究结果显示对于RHC等位基因的基因定型结果总令人不满意。研究表明白种人中具有RhC抗原个体其RHCE基因内含子(intron)2都有109bp插入序列,然而,有研究显示利用这一多态性来检测RHC等位基因存在假阴性。另据报道白种人RHC等位基因在外显子1的nt48位100%是C,然而白种人中有5.2%的RHc等位基因在此位点发生G>C突变,而且,表型为Rhcc非洲黑人中74%个体外显子1的48位都是C。另有报道RHCE基因外显子5的733位核苷酸存在C>G多态性,在白种人中为2%,在非洲裔黑人中为50%,亚洲人尚未见到相关报道。对中国南方汉族和西藏藏族RHCE基因多态性的比较研究有助于深入了解中国人RH基因的结构特点和民族遗传背景差异,探讨RH基因在进化、重组和突变中的作用机制,揭示RHCE基因多态性的遗传背景差异和民族差异,为RHCE基因的准确定型奠定基础。目的1.研究中国南方汉族人群和西藏藏族人群RHC等位基因exon1中48G>C多态性,并比较两民族在此位点的多态性差异。2.研究中国南方汉族人群和西藏藏族人群RHC等位基因intron2中109bp插入序列缺失情况,并比较两民族在此特异性的差异。3.研究中国南方汉族人群和西藏藏族人群exon5中733C>G多态性,并比较两民族733C>G多态性分布差异。4.比较研究中国南方汉族和西藏藏族RHCc等位基因的多态性差异,探讨中国人RHCc等位基因的基因定型方法的准确性。方法1.样本收集。187例健康随机非血缘关系中国南方汉族人样本由广东省中医院提供；51例健康随机非血缘关系西藏藏族人(长期居住在西藏且三代内未与外族通婚的藏族)样本由西藏自治区血液中心提供。2.采用微柱凝胶法对Rh表型进行分型,对RhD初筛阴性样本用抗人球蛋白法确认。3.应用聚酶链反应-序列特异性引物法(Polymerase Chain Reaction-Sequence Specific Primer, PCR-SSP)对RHCE基因进行基因定型。4.设计特异性引物,应用PCR-SSP方法对RHCE基因exon1的48G>C多态性和intron2的109bp插入序列进行检测。5.对筛选出的RHCc基因定型结果与表型不一致的样本进行测序,并分析其序列差异,探讨RHCc基因定型方法的准确性。6.设计特异性检测引物,应用PCR-SSP方法对exon5的733C>G多态性进行检测,并用测序方法验证。结果1.中国南方汉族人群和中国西藏藏族人群RHCE基因exon1中存在48G>C多态性,在汉族人群中为3.23%,在中国西藏藏族人群中为12%,二者相比存在统计学差异(X2=6.2,P<0.01)。应用RHCE基因exon1的48G>C多态性来检测中国南方汉族人群RHC基因,存在3.23%的假阳性,用来检测中国西藏藏族人群RHC基因存在12%的假阳性。2.在中国南方汉族人群中携带RhC抗原个体其RHCE基因intron2中109bp插入序列的缺失率为1.08%,在西藏藏族人群中缺失概率为0,二者缺失率相比无统计学差异(X2=1.2,P>0.05)。应用RHCE基因intron2的109bp插入序列来检测中国南方汉族人群RHC等位基因存在1.08%的假阴性,用来检测中国西藏藏族人群RHC等位基因是否可行尚需进一步验证。3.中国南方汉族人群和西藏藏族人群所有样本RHCE基因exon5的733位核甘酸均为G,未发现该位点存在733C>G多态性。结论1.中国南方汉族人群在RHCE基因intron2中存在109bp插入序列缺失,在exon1存在48G>C多态性,但未发现在exon5存在733C>G多态性和突变情况。2.中国西藏藏族人群在RHCE基因exon1存在48G>C多态性,未发现intron2中存在109bp插入序列缺失,也未发现在exon5存在733C>G多态性和突变。3.中国南方汉族人群和西藏藏族人群在RHCE基因exon1的48G>C多态性分布中存在差异,而在intron2的109bp插入缺失和exon5的733C>G多态性方面未发现二者有差异。4.针对exon1的48G>C多态性位点和内含子2的109bp插入序列来检测RHCc基因会因突变和缺失而导致假阳性和假阴性错误。