慢性骨髓炎,一直被医学界认为是屈居于癌症之后的第二大顽疾,临床常规的治疗方法是彻底清创后连续大剂量应用抗生素治疗,由于慢性骨髓炎病程较长,长期频繁给予比较敏感的抗生素导致耐药性增加,使得慢性骨髓炎的复发率居高不下。盐酸万古霉素是第一代糖肽类抗生素,可以通过抑制细菌细胞壁中磷脂和多肽的生成干扰细胞壁的合成,从而抑制细菌的生长和繁殖,与其他抗生素没有交叉耐药性,极少产生耐药菌株,对大多数的革兰氏阳性菌有效,特别是金黄色葡萄球菌。虽然它特异性作用于细菌细胞壁的肽聚糖,但在早期应用过程中出现比较明显的肾毒性、耳毒性以及神经肌肉阻滞等副作用。慢性骨髓炎患者免疫力较差,极易导致急性肾损伤以及慢性肾脏疾病。这阻碍了慢性骨髓炎的治疗,给临床药学工作者提出了新的研究课题。脂质体是一种极具潜力的缓控释系统,有良好的包封水溶性药物的能力。由于它的脂质双分子层是由磷脂和胆固醇组成,这两种成分跟细胞膜相似,极易与感染的细菌融合,因此脂质体被认为是一种无毒性的生物可降解的缓控释药物传递系统。而运用层层静电沉积的原理,采用滴注法,将带正电荷的天然多糖壳聚糖包裹在脂质体表面,与带负电的细胞膜相互作用,打开上皮细胞之间的紧密连接,有利于大分子物质在上皮组织间的转运,从而增加亲水性大分子细胞旁路的通透性,促进亲水性大分子药物的吸收。本课题首先以注射用大豆卵磷脂和胆固醇为载体材料,采用改良的逆相蒸发法制备了盐酸万古霉素脂质体；然后采用滴注法制备壳聚糖包裹的盐酸万古霉素脂质体,并对两种盐酸万古霉素脂质体的理化性质、体外释药性和初步安全性进行了研究；最后以盐酸万古霉素溶液为对照,对两种脂质体在小鼠体内的药物动力学及组织分布进行了研究,通过药动学参数评价其在小鼠体内的缓释性和靶向性。1.盐酸万古霉素脂质体的制备与理化性质研究建立了HPLC法测定脂质体中盐酸万古霉素含量的方法,并对方法学进行验证；建立了超滤离心法测定盐酸万古霉素脂质体的包封率,并进行了方法学考察。根据盐酸万古霉素的溶解特性,以粒径和包封率为考察指标,选择改良后的逆相蒸发法制备盐酸万古霉素脂质体,并对制备工艺进行了系统研究,在单因素考察的基础上,采用正交试验设计,优化得到最佳处方组成和制备工艺；采用透射电子显微镜观察其外观形态,用激光粒径和电位分析仪测定粒径和zeta电位；并对其载药量、包封率、pH值等理化性质进行考察,验证处方组成和制备工艺的可行性。方法学考察结果表明：HPLC法测定脂质体中盐酸万古霉素含量的方法,辅料不干扰药物的测定,专属性强,精密度、回收率均符合测定要求。采用超滤离心法测定盐酸万古霉素脂质体的包封率,方法省时节能,回收率高,重现性好。采用最佳处方和工艺制备的盐酸万古霉素脂质体,透射电镜下观察呈类球形,大小分布均匀,平均粒径为188.4±5.22nm,平均Zeta电位为-10.1±4.40 mV,包封率为40.78±1.04%,载药量为2.55±0.065%,pH值为5.96±0.066,符合注射要求；三批脂质体重现性试验结果表明,处方组成合理,制备工艺可行。2.壳聚糖包裹的盐酸万古霉素脂质体的制备与理化性质研究采用滴注法制备了壳聚糖包裹的盐酸万古霉素脂质体,通过考察壳聚糖分子量、壳聚糖用量以及脂质体混悬液与壳聚糖体积比对c-VANH-Lip Zeta电位的影响,确定了最佳处方。采用透射电子显微镜观察其外观形态,用激光粒径和电位分析仪测定粒径和zeta电位；并对其载药量、包封率、pH值等理化性质进行考察,验证处方组成和制备工艺的可行性。结果表明,采用滴注法成功制备了壳聚糖包裹的盐酸万古霉素脂质体,透射电镜下观察呈类球形,大小分布均匀；按最佳处方和工艺制备的壳聚糖包裹的盐酸万古霉素脂质体与普通脂质体比较,其粒径略有增加,Zeta电位从荷负电逐渐转化成荷正电,平均粒径为220.4±3.56nm,平均Zeta电位为25.7±1.12 mV,包封率为32.65±0.586%,载药量为2.18±0.039%,平均pH值为4.95±0.082,符合注射要求；三批脂质体重现性试验结果表明,处方组成合理,制备工艺可行。3.两种盐酸万古霉素脂质体的体外释药性及初步安全性评价采用动态膜透析法比较VANH-Lip和c-VANH-Lip两种盐酸万古霉素脂质体的体外释放特性,并对释放曲线进行数学模型拟合。另外,采用健康家兔进行了体外溶血试验,初步评价了其安全性。体外释放结果表明,相比于盐酸万古霉素溶液,两种盐酸万古霉素脂质体体外释药曲线相似,药物均表现出一定的缓释作用,均符合weibull方程。其中c-VANH-Lip释放相对更缓慢,可能是由于壳聚糖的包裹,降低了脂质的暴露程度,从而减少药物的泄漏,突释现象明显降低；增加了c-VANH-Lip膜的厚度,延缓脂质体中药物的释放。体外溶血试验中,肉眼观察两种脂质体均未发生溶血及凝集现象,表明两种脂质体安全、可靠,可应用于静脉注射。4.小鼠体内药物动力学及组织分布研究建立了HPLC法测定VANH在小鼠血浆和各组织中浓度的方法,并进行方法学考察；以盐酸万古霉素溶液为对照制剂,研究小鼠尾静脉注射VANH-Lip和c-VANH-Lip后的药动学特性和组织分布的差异,计算脂质体靶向参数,评价其组织的靶向性。方法学考察表明,本部分所建立的HPLC法测定VANH在小鼠血浆和各组织中浓度的方法,能够满足生物样品测定的要求。小鼠体内药物动力学结果表明,VANH-Sol组的消除半衰期为1.888h, VANH-Lip组为2.240h, c-VANH-Lip组为3.490h,相比于VANH-Sol组,VANH-Lip组和c-VANH-Lip组的消除半衰期分别延长了0.19和0.85倍；与半衰期相同,VANH-Lip组和c-VANH-Lip组的平均滞留时间(MRT 0-∞)比VANH-Sol组分别延长了0.63倍、1.60倍；对于血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-∞), VANH-Sol组为22.490 mg/1·h, VANH-Lip组为44.710 mg/1·h, c-VANH-Lip组为59.908 mg/1·h, VANH-Lip组比VANH-Sol组增大了0.99倍；c-VANH-Lip组比VANH-Sol组和VANH-Lip组分别增大了1.66倍和0.34倍。这说明将盐酸万古霉素制成壳聚糖包裹的脂质体,延长了VANH的体内作用时间,提高了VANH的治疗效果。可以通过减少给药次数,降低给药剂量,达到与盐酸万古霉素注射剂相同的治疗效果。小鼠体内组织分布结果表明,对于VANH-Lip组,在肝、脾中的Re值分别是2.167和1.982；对于c-VANH-Lip组,在肝、脾中的Re值分别是3.594和1.985,而两种脂质体在肾脏的Re值分别为0.645和0.607。相对于VANH-Sol组,VANH-Lip组和c-VANH-Lip组肾脏的分布明显降低,这有利于减少VANH在临床应用中出现的肾毒性。综上,本课题成功构建了壳聚糖包裹的盐酸万古霉素脂质体给药系统,制备工艺简单可靠,重现性好,包封率相对较高,各项理化性质均符合静脉注射要求；体外释放实验结果表明,与盐酸万古霉素脂质体相比,壳聚糖包裹的盐酸万古霉素脂质体缓释作用更强；体外溶血实验结果表明其无溶血现象,静脉注射无刺激性；小鼠药动学以及组织分布实验结果表明,VANH在体内的循环时间延长,有助于提高VANH的治疗效果。相对于VANH-Sol组,VANH-Lip组和c-VANH-Lip组肾脏的分布明显降低,这有利于减少VANH在临床应用中出现的肾毒性,为VANH的长期应用和骨髓炎的长期治疗提供了临床应用价值。