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目的:探究NLRP3炎性体及其下游因子Caspase1的过表达是否与血液肿瘤耐药有一定相关性,其表达升高是否会引起血液肿瘤对化疗药物的耐药从而促进血液肿瘤的进展及复发,抑制炎性体及其相关因子的活性是否会增加血液肿瘤对化疗药物的敏感性。从而为干预炎症信号逆转肿瘤耐药提供实验依据。方法:1.筛选细胞株与化疗药物通过LPS与ATP刺激SUP-B15(B-ALL)细胞株、(MOLM-13)AML细胞株、IM9(MM)细胞株、Raji(伯基特淋巴瘤)细胞株,诱导NLRP3炎性体及其下游因子Caspase1过表达。离心,弃上清,使用细胞培养基重悬经LPS与ATP预处理过的细胞,与不同的化疗药物共同孵育24h,48h,72h后,CCK8检测细胞活力变化,并筛选出有意义的细胞株与对应化疗药物。2.抑制Caspase1的活性后是否可以逆转耐药作用在经过LPS与ATP刺激前,用Caspase1抑制剂预处理阳性细胞株,离心,弃上清,再与化疗药物共同孵育,CCK8法检测细胞增殖,探究Caspase1抑制剂是否可以逆转耐药作用。3.抑制NLRP3炎性体的活性后是否可以逆转耐药作用在经过LPS与ATP刺激前,用NLRP3抑制剂预处理阳性细胞株,离心,弃上清,再与化疗药物共同孵育,CCK8法检测细胞增殖,探究NLRP3炎性体抑制剂是否可以逆转耐药作用。4.RT-PCR和Western Blot检测阳性细胞株的NLRP3及其下游因子Caspase1的表达通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR),Western Blot的方法检测以下各组的NLRP3、Caspase1的RNA、蛋白水平的表达:对照组、LPS与ATP、LPS+ATP+化疗药物、NLRP3抑制剂+LPS+ATP+化疗药物、Caspase1抑制剂+LPS+ATP+化疗药物。5.探究NLRP3及Caspase1过表达的机制相关研究表明活性氧在NLRP3及Caspase1的表达中起到了关键作用,用流式的方法检测经以下各组活性氧的表达水平:对照组、LPS与ATP、NLRP3抑制剂+LPS+ATP、Caspase1抑制剂+LPS+ATP、ROS抑制剂+LPS+ATP。6.抑制活性氧的表达对NLRP3及下游因子Caspase1的表达的影响及能否逆转耐药作用在经过LPS与ATP刺激前,用活性氧抑制剂预处理阳性细胞株,离心,弃上清,再与化疗药物共同孵育,收集细胞用RT-PCR和Western Blot的方法检测经过ROS抑制剂预处理后的细胞株的NLRP3、Caspase1在蛋白和RNA水平上的表达变化,CCK8法检测细胞增殖。7.临床患者标本的检测搜集非复发难治、复发及难治的血液肿瘤的病人的骨髓标本,分离单个核细胞,提取蛋白和RNA,使用Western Blot和RT-PCR的方法检测其NLRP3、Caspase1的表达水平。实验结果:1.经过LPS与ATP刺激后的急性淋巴细胞白血病细胞株(SUP-B15)表现出对阿霉素、去甲氧柔红霉素、阿糖胞苷的细胞毒作用的抵抗性,提示LPS与ATP使肿瘤细胞对化疗药物产生了耐药性。2.加用Caspase1和NLRP3抑制剂后,LPS与ATP刺激细胞后的产生耐药作用则被逆转,猜测Caspase1和NLRP3的表达升高在肿瘤细胞耐药过程中起到了重要作用。3.RT-PCR和Western Blot结果显示经过LPS与ATP处理后的细胞其Caspase1和NLRP3的表达是升高的;VX-765(Caspase1抑制剂)能够抑制Caspase1的表达,NLRP3的表达无明显变化;MCC950(NLRP3抑制剂)均能够抑制NLRP3和Caspase1的表达。4.流式检测经过LPS与ATP刺激后的细胞,其ROS的表达是升高的,加用Caspase1抑制剂和NLRP3抑制剂组显示其ROS的水平无明显变化,加用ROS抑制剂的细胞其ROS的水平是降低的。5.加用ROS抑制剂后对NLRP3炎性体及其下游因子Caspase1的表达有一定抑制作用,对耐药作用有一定逆转作用。6.难治复发的B-ALL患者的Caspase1和NLPR3的表达在蛋白和RNA水平较于非复发难治的患者均升高。结论:1.NLRP3炎性体及其下游因子Caspase1的过表达可以诱导急性B淋巴细胞白血病细胞株对阿霉素、阿糖胞苷和去甲氧柔红霉素的耐药作用。2.抑制NLRP3和Caspase1的活性在一定程度上可以逆转耐药作用。3.LPS和ATP可以通过诱导活性氧的产生进而促进NLRP3炎性体及其下游因子Caspase1的表达。4.复发难治的B-ALL患者的NLRP3和Caspase1的表达升高。