【摘 要】
：
目的:雷公藤红素具有抗炎症反应、抑制肿瘤血管生成、抑制肿瘤生长、抑制肿瘤转移等多种药理作用。为了揭示雷公藤红素抑制肝癌转移的重要机制,我们在研究肝癌转移的过程中发现细胞骨架蛋白Ezrin的Thr567位点的磷酸化改变能够抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。为进一步研究雷公藤红素是否通过影响Ezrin磷酸化实现抑制肝癌细胞迁移的作用,通过蛋白质免疫沉淀实验检测细胞裂解液中Ezrin磷酸化水平,对肝癌迁移进行研
论文部分内容阅读
目的:雷公藤红素具有抗炎症反应、抑制肿瘤血管生成、抑制肿瘤生长、抑制肿瘤转移等多种药理作用。为了揭示雷公藤红素抑制肝癌转移的重要机制,我们在研究肝癌转移的过程中发现细胞骨架蛋白Ezrin的Thr567位点的磷酸化改变能够抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。为进一步研究雷公藤红素是否通过影响Ezrin磷酸化实现抑制肝癌细胞迁移的作用,通过蛋白质免疫沉淀实验检测细胞裂解液中Ezrin磷酸化水平,对肝癌迁移进行研究,并在肝癌细胞中检测雷公藤红素处理前后Ezrin蛋白表达以及其磷酸化的影响,探索雷公藤红素对肝癌细胞迁移的重要机制。本实验采用雷公藤红素研究Ezrin磷酸化抑制肿瘤迁移的可能机制,并选择了两种具有代表性的肝癌细胞系,分别是增殖性较好的肝癌HepG2细胞系和高侵袭性肝癌MHCC97H细胞系。然而,目前尚不清楚这两种细胞系在雷公藤红素的刺激下是否有类似的Ezrin的Thr567位点的磷酸化改变。因此,本文旨在明确雷公藤红素处理前后Ezrin蛋白及其磷酸化在肝癌细胞迁移侵袭过程中的变化以及雷公藤红素抑制肝癌转移的作用机制。方法:采用蛋白质免疫印迹实验检测细胞增殖的蛋白标志物,探讨不同浓度和不同时间的雷公藤红素处理后对肝癌HepG2细胞系和高侵袭性肝癌MHCC97H细胞系的Ezrin蛋白及其磷酸化水平的影响;采用免疫荧光实验和蛋白质免疫印迹实验检测细胞裂解液中Ezrin Thr567的水平,探讨不同浓度和不同时间雷公藤红素处理后对肝癌HepG2细胞和高侵袭性肝癌MHCC97H细胞系的Ezrin Thr567磷酸化的影响,从而找到雷公藤红素最佳的处理浓度和最佳的处理时间;采用细胞划痕实验以及活细胞追踪实验分别从肝癌细胞的平均迁移速率和单个细胞的迁移速率研究肝癌细胞的迁移性,探讨并验证最佳处理浓度和最佳的处理时间的雷公藤红素处理后对肝癌HepG2细胞和高侵袭性肝癌MHCC97H细胞的迁移影响,对肝癌细胞的抑制情况;采用构建Ezrin Thr567突变体Ezrin T567A和Ezrin T567D并转染入肝癌细胞中分别模拟Ezrin Thr567非磷酸化和磷酸化的状态,通过活细胞追踪实验观察转染含有荧光标记的Ezrin Thr567A、Ezrin Thr567D的高侵袭性肝癌MHCC97H细胞的运动迁移情况;根据Rho激酶抑制剂Y27632对Rho激酶的抑制作用导致Ezrin Thr567磷酸化水平的降低和对癌细胞侵袭和转移的阻断的情况为基础,采用IP实验检测雷公藤红素对ROCK-Ezrin之间的相互作用关系,从而确定雷公藤红素是否能干预Ezrin介导的肝癌转移并深入揭示雷公藤红素抑制肝癌细胞迁移的重要机制。结果:（1）雷公藤红素对肝癌细胞Ezrin磷酸化水平的影响的免疫印迹实验和免疫荧光实验结果显示:雷公藤红素处理后Ezrin蛋白以及Ezrin Ser66磷酸化水平无影响,Ezrin Thr567的磷酸化水平受到影响并且表现出比较明显的浓度依赖趋势,且在雷公藤红素为1 μM时Ezrin Thr567的磷酸化水平明显降低。（2）根据雷公藤红素按照时间梯度和浓度梯度的处理下对肝癌细胞Ezrin Thr567磷酸化水平的影响的蛋白质免疫印迹实验结果显示:在肝癌HepG2细胞系和高侵袭性肝癌MHCC97H细胞系中,雷公藤红素对Ezrin Thr567磷酸化水平均产生影响并且分别具有浓度依赖性和时间依赖性,且找到了雷公藤红素的最佳处理浓度和最佳处理时间。即在雷公藤红素的浓度为1μM时以及处理时间为6h时,Ezrin Thr567的磷酸化水平明显降低。（3）能够反映肝癌细胞平均迁移速率的细胞划痕实验结果显示:1μM的雷公藤红素处理后,相对对照组而言,肝癌细胞愈合的速率明显降低。（4）能够反映单个细胞迁移状态及速率的活细胞追踪实验结果显示:1μM的雷公藤红素处理后,单个细胞的迁移范围相较对照组明显受限且迁移速率降低。（5）构建Ezrin Thr567突变体并转染带荧光标记的质粒,模拟Ezrin Thr567位点的磷酸化和非磷酸化的肝癌细胞运动,通过实验结果可以表明:模拟非磷酸化的Ezrin T567A的肝癌细胞迁移范围受限且迁移速率降低。（6）采用IP实验检测雷公藤红素对ROCK-Ezrin之间的相互作用关系,实验结果显示:雷公藤红素处理后IP组的ROCK1蛋白水平明显降低,即雷公藤红素减弱ROCK-Ezrin的相互作用力。结论:（1）雷公藤红素具有降低Ezrin pT567磷酸化水平抑制肿瘤转移,最佳处理浓度为1 μ M,最佳时间为6h。（2）雷公藤红素调节Ezrin磷酸化抑制肝癌转移的机制是通过阻断Rho激酶介导的Ezrin磷酸化实现的。
其他文献
高光谱成像作为遥感领域的重要分支,因其极高的光谱分辨率,在地物高精度分析方面具有着不可替代的优势,在国防建设与经济发展中的众多领域都有着极为广泛的应用。因此,高光谱图像的高精度分类已经成为高光谱图像处理中的重要课题。但是,在高光谱图像中,一些噪声与冗余波段对其传输与分析处理带来了困难,这使得高光谱波段选择的重要性越发凸显。深度学习的蓬勃发展展示了其强大的学习与表征能力,相关方法与高光谱处理领域的结
细粒度图像识别研究近年来逐渐兴起,在无人零售、智慧交通、人机交互等方面具有广泛应用。本文就transformer在细粒度图像识别领域存在空间特征提取粒度过于粗糙及模型参数过大存在计算冗余两大弊端分别展开研究,一方面,进一步细化transformer的特征提取粒度,另一方面,在保持理想识别精度的情况下压缩其参数量、去除冗余计算,便于实际应用。本文的主要的研究内容及技术创新如下:第一,针对原始tran
人体姿态迁移旨在目标姿态的引导下,将原始图像的人物姿态转换至相应的目标姿态,并保持人物身份和外观的一致性。该研究在游戏绘画、电影制作和虚拟试衣等领域具有极大的商业前景,此外,该研究还被应用于去伪检测和行人重识别研究课题,作为数据增强的解决方案。近年来,随着人工智能浪潮的来临,人体姿态迁移技术得到了快速发展,在姿态迁移准度、多姿态泛化性能以及商业落地应用等方面均有显著进步与提高。然而,当前人体姿态迁
计算机视觉在工业生产、物体检测、先进的车辆安全系统等领域的广泛应用中发挥着至关重要的作用。然而下雨等特殊天气导致所拍摄的图像质量下降和细节丢失,从而影响物体检测、自动驾驶车辆检测和监控设备等任务。因此,对获得的图像进行图像恢复以生成干净的图像,有利于提高目标检测算法的准确性。本文使用Efficient De Rain算法提高物体检测率和准确率。它将作为图像的预处理,并通过深度学习算法进行对象检测。
在底层计算机视觉任务中,超分辨技术通过增加图像的空间分辨率,提供更多语义信息来弥补成像设备的不足。传统图像超分辨方法将其建模为优化问题,引入先验作为约束条件,来逼近真实图像,但存在人工设计先验单一、无法满足实时需求的问题。基于深度学习的方法利用大规模数据的优势,在图像超分辨上取得更好的视觉效果。然而,现有工作对任意倍数超分任务的研究较少,且精度最优模型的参数量巨大,难以在边缘设备上部署。针对上述问
推荐系统是解决信息过载问题的关键技术,通过挖掘用户的属性信息、物品的属性信息以及用户的历史行为日志来分析用户的兴趣偏好并为用户生成推荐列表。本文对物品评分预测和会话推荐两个推荐场景进行了研究,设计了三个推荐模型,有效提升了推荐性能,具体工作如下:（1）现有的物品评分预测方法通常为用户和物品的特征设置统一固定维度,并且假设特征嵌入维度之间彼此独立,对用户和物品在不同空间维度中的交互特征提取不充分,导
高光谱图像具有丰富的空间信息与光谱信息,在环境监控,精准农业等领域具有重要的作用。随着深度学习的发展,基于神经网络的高光谱图像分类技术越来越成熟。但在一些需要模型增量式,持续式学习的高光谱图像分类任务中,或者在模型以往训练过的数据不能获取的情况下想要得到模型对新旧数据良好的分类能力时,模型往往会出现灾难性遗忘问题。增量学习方法可以解决这类问题。本文针对有回放的高光谱图像增量分类任务,做出了以下的探
随着深度学习技术的不断发展,高性能神经网络结构的研究愈发重要,设计能够满足不同任务需求的网络结构成为热点研究问题。然而,神经网络结构的设计不仅需要相关的专业知识,还往往需要大量的时间和计算资源来进行结构试错,这对于普通用户而言门槛较高。神经网络结构搜索作为自动机器学习中的重要一环,它能根据指定任务进行网络结构的自动化搜索,大幅度降低了深度学习的使用门槛,用户无需学习网络结构设计相关的专业知识,就能
基于神经网络的深度学习技术目前已广泛应用于各个领域,一旦神经网络模型遭到攻击,将对人们的隐私和财产安全产生巨大的威胁,因此神经网络模型的安全性成为研究热点。对抗样本生成技术是攻击网络模型以及检测网络模型鲁棒性的关键技术,同时对该技术的研究有助于推动对抗防御技术的发展,帮助提高神经网络的可解释性。本文关注图像识别下的对抗样本生成问题,主要从白盒场景中的对抗样本生成、黑盒场景中基于迁移和基于查询的对抗
近年来,随着物流业及其相关产业的快速发展,对最优路线规划的需求也在日益增加,由此而产生的车辆路径规划问题同时吸引了众多研究者的关注。其中,多仓库车辆路径规划问题的应用尤为广泛。这类问题考虑到实际中的多个仓库作为路径的起始点,以配送的形式,在适当的时间将一定数量的货物在顾客之间运送,实现生产与消费的无缝连接,最大程度地满足客户的消费需求。多仓库车辆路径规划问题本质上是离散型约束多目标优化问题,特点是