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目的:术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)是麻醉手术后出现的一种常见中枢神经系统并发症,尤其好发于老年患者,但其具体机制尚不清楚。微清蛋白(parvabumin,PV)中间神经元在认知处理过程中发挥重要作用,其功能障碍会引起各种神经精神疾病。我们前期研究发现,海马PV表达下降在单纯异氟烷麻醉致老年小鼠认知功能损伤中发挥重要作用,但PV在POCD发生中的变化及其作用尚不清楚。由于PV中间神经元具有高代谢的特点,因此它对氧化还原反应失调及氧化应激易损。新近研究表明:磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶依赖的超氧化物的产生可导致PV表达下降,从而参与多种脑相关疾病的发生。因此我们提出假说,手术创伤可活化NADPH氧化酶,从而产生过多的活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS),随后下调海马内PV表达,最终引起认知功能损伤。本研究旨在观察海马PV表达变化在POCD中的作用,并研究NADPH氧化酶是否参与其中。方法;16月龄的雄性C57BL/6小鼠采用异氟烷麻醉+剖腹探查术建立POCD模型。本研究分为3个实验进行,实验一分为2组(n=13):对照组(Control组)和手术组(Surgery组)。每组取8只小鼠于术后第6 d和7 d分别行旷场实验和条件恐惧性实验。每组剩余5只不进行行为学实验,于术后第7 d取海马和皮层,采用Western blot检测PV、gp91Phox、p22phox(NADPH氧化酶的两个重要亚基)的表达变化。实验二分为2大组,分别接受夹竹桃麻素(Apocynin;APO;NADPH氧化酶的抑制剂)长期给药和单次给药。每大组又分为4小组(APO长期给药组,n=18;APO单次给药组,n=10):对照+溶剂组(Control+vehicle组)、对照+APO 组(Control+APO 组)、手术+溶剂组(Surgery+vehicle 组)及手术+APO组(Surgery+APO组)。APO长期给药组为术后1h(或相同时点)皮下注射APO 5 mg/kg(或等容量的溶剂),每天一次至术后第7 d;APO单次给药组为麻醉前即刻(或相同时点)皮下注射APO20mg/kg(或等容量的溶剂)。长期给药组中各小组取8只小鼠于术后第6 d和7 d分别行旷场实验和条件恐惧性实验;剩余10只不进行行为学实验,仅于术后第7d分别取5只行Westem blot(海马)和免疫荧光(大脑)实验以检测PV、gp91phox、p22phox、IL-1β及各氧化应激相关指标的表达。单次给药组于术后24 h取脑组织行上述实验。实验三为体外实验,分别用脂多糖(LIopolysaccharide,LPS)和APO处理培养了 14 d的海马原代神经元,实验分为4组:对照组(Contro1组)、对照+ APO组(Control+APO组)、脂多糖组(LPS组)及脂多糖+APO组(LPS+APO组)。药物处理24h后收细胞行免疫荧光实验以检测PV、gp91phox、p22phox和突触后致密物95(Postsynaptic density 95,PSD95;兴奋性突触标记物)的表达。结果:实验一结果显示,与Control组相比,Surgery组在场景性条件恐惧测试中僵直时间明显减少;海马PV表达明显下降,gp91phox和p22phox表达明显上升(P＜0.05);皮层PV表达差异无统计学意义(P＞0.05),gp91phox和p22phox表达明显上升(P＞0.05)。实验二结果显示,长期给药后,与Control+vehicle组相比,Surgery+vehicle组在场景性条件恐惧测试中僵直时间明显减少,海马PV表达明显下降,gp91phox、p22Phox、IL-1β和各氧化应激相关指标表达明显增高(P<0.05);与Surgery+vehicle组相比,Surgery+APO组在场景性条件恐惧测试中僵直时间明显增加,海马PV表达明显上升,gp91phox、p22phox、IL-1β和各氧化应激相关指标表达明显下降(P＜0.05)。单次给药后生化检测结果与长期给药后结果一致。实验三结果显示,与Contro1组相比,LPS组PV表达明显下降,gp91phox和p22phox表达明显增高,同时PSD95数量减少(P＜0.05);与LPS组相比,LPS+APO组PV表达明显上升,gp91phox和p22phox表达明显下降,同时PSD95数量明显增多(P＜0.05)。结论:海马中PV表达下调参与老年小鼠POCD的发生,这一过程可能由NADPH氧化酶源性的ROS所介导。