目的:构建人血管内皮生长因子(human vascar endothelial growth factor,hVEGF₁₆₅)腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）载体AAV-hVEGF₁₆₅,并体外检测其在椎间盘纤维环细胞中的表达,以及观察AAV-hVEGF₁₆₅与AAV-TGFβ1（transforming growth factor betal,TGFβ1）基因联合转染对纤维环细胞Ⅰ型胶原的生物学效应。探讨应用hVEGF₁₆₅基因逆转椎间盘退变可行性。 方法:采用分子克隆技术,从pcDNA3（+）-hVEGF₁₆₅质粒获得hVEGF₁₆₅cDNA,并克隆至AAV包装质粒pSNAV上,构建成pSNAV-hVEGF₁₆₅的AAV重组质粒,经酶切及测序鉴定正确,用脂质体介导pSNAV-hVEGF₁₆₅转染HEK293细胞和血管内皮细胞（vascarendothelial cell,VEC）,荧光免疫组化方法检测 hVEGF₁₆₅蛋白,并用MTT法测定hVEGF₁₆₅对VEC增殖的影响。由本元正阳公司对鉴定正确的pSNAV-hVEGF₁₆₅进行AAV-hVEGF₁₆₅的包装。AAV-hVEGF₁₆₅与AAV-TGFβ1联合转染原代培养的椎间盘纤维环细胞,Western blotting检测hVEGF₁₆₅与TGFβ1的表达以及纤维环细胞Ⅰ型胶原表达量的变化。 结果:经酶切鉴定及基因测序证实AAV包装质粒pSNAV-hVEGF₁₆₅构建完成,荧光免疫组化显示hVEGF₁₆₅蛋白的表达,对照未见hVEGF₁₆₅蛋白的表达,MTT法显示hVEGF₁₆₅蛋白对VEC增殖有促进作用。本元正阳公司包装出具有生物学功能的AAV-hVEGF₁₆₅,AAV-hVEGF₁₆₅构建成功。Western blotting显示hVEGF₁₆₅与TGFβ1在纤维环细胞中表达,AAV-hVEGF₁₆₅与AAV-TGFβ1基因联合转染的纤维环细胞Ⅰ型胶原表达量明显比对照和单基因转染的细胞Ⅰ型胶原表达量多。 结论:构建的腺相关病毒载体AAV-hVEGF₁₆₅可在体外表达,hVEGF₁₆₅在体外能够协同TGFβ1促进纤维环细胞Ⅰ型胶原表达的增加,hVEGF₁₆₅有可能基因逆转椎间盘的早期退变。