大鼠脑组织匀浆液对骨髓间充质干细胞向神经细胞方向诱导分化的影响

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目的:  探讨体外分离培养BMSCs的条件,并观察新生大鼠脑组织匀浆液对BMSCs诱导分化的影响。  方法:  1.选用健康SD大鼠,用贴壁培养法分离纯化BMSCs,显微镜下观察细胞的形态和生长特性,采用流式细胞学技术检测BMSCs细胞表面抗原分子,通过免疫表型鉴定BMSCs。  2.取第3代BMSCs,采用贴壁培养法诱导向神经方向分化,实验分为空白对照组和新生大鼠脑组织匀浆液诱导组,对照组用L-DMEM培养基继续培养,诱导组用新生大鼠的脑组织匀浆液培养,连续培养7d。  3.诱导后采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用RT-PCR技术检测神经细胞表面标志物的表达。  结果:  1.利用贴壁法传代培养的BMSCs,细胞形态比较均一,细胞形态呈成纤维样或纺锤样,成漩涡状或簇状生长;流式细胞学检测结果显示BMSCs稳定表达表面分子CD90(95.3%),CD29(99.9%),几乎不表达造血系统表面分子CD45(0.1%),CD11(3.8%),CD90和CD29的双阳性共表达率可达97.6%,CD45和CD11b的双阳性共表达率为0.1%。  2.诱导后的BMSCs倒置显微镜下观察细胞形态呈现神经细胞样改变,RT-PCR检测结果显示新生大鼠脑组织匀浆诱导组BMSCs表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经微管蛋白(β-Ⅲ-tubulin)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。  结论:  1.采用全骨髓贴壁培养方法,可以获得较高细胞纯度,操作简单易行,是一种较为理想的培养BMSCs的方法。  2.新生大鼠脑组织匀浆液可以促进BMSCs向神经方向分化。
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