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我国是胃癌的高发区,胃癌的发病率在各种消化道恶性肿瘤中占首位,是严重危害人民健康的主要疾病之一。从分子水平了解胃癌的病因,寻找理想的胃癌分子标记,积极探索胃癌的基因治疗是进一步提高防治水平的基础与方向。全面了解胃粘膜细胞在各种条件下发生癌变过程中的基因改变,筛查胃癌相关基因,将为这些问题的解决提供可靠的线索。第一部分 利用基因表达谱芯片获取胃腺癌中差异表达的基因 目的:应用基因表达谱芯片筛选胃腺癌相关基因并对这些基因的功能进行初步分析。方法:按一步法抽提胃腺癌和对照正常胃粘膜组织的RNA并纯化mRNA;将12800种人类基因PCR产物用Cartesian Pixsys 7500点样仪按微矩阵排列点样于化学涂层的载玻片上,制成基因芯片;将等量的对照正常胃粘膜组织和胃腺癌组织mRNA分别逆转录合成荧光分子掺入的cDNA一链做探针,混合后杂交上述基因芯片。经严格洗片后用ScanArray 3000扫描仪扫描芯片荧光信号图像,计算机分析后比较两种组织中差异表达的基因。结果:在12800条基因中,胃腺癌与对照正常胃粘膜组织间存在差异表达的基因。在所检测的5例临床标本中均存在显著差异表达的基因共27条(0.21%),其中上调的11条(0.086%),下调的16条(0.125%),下调的基因中有2条为新基因。对差异表达的基因进行初步生物学信息分析。结论:微矩阵基因芯片在筛选胃腺癌发生相关基因的改变时具有快速、高通量、高敏度等特点,胃腺癌基因差异表达谱的分析为胃癌的诊治提供了新的思路和线索。第二部分 二条胃腺癌相关基因的初步研究 目的:对二条胃腺癌相关新基因1909C01、1007G07的结构和功能进行初步研究。方法:利用National Center of Biotechnology Information(NCBI,网址http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中的核苷酸序列数据库、蛋白质序列数据库、开放阅读框分析软件等工具对1909C01和1001G07基因的全长核苷酸序列的同源性、开放阅读框和可能编码蛋白的氨基酸序列同源性进行分析,并对二条新基因的功能作出推测。结果:分析发现,1909C01有一个1323bp的阅读框,编码含440个氨基酸残基的蛋白,核苷酸序列与小鼠AK013305基因有四个较高同源性片段,与人FLB3342基因有159bp的100%的同源性片段,但序列方向相反;无同源性很高的阅读框和已知蛋白。1001G07有一个378bp的阅读框,编码含125个氨基酸残基的蛋白,核苷酸序列、开放阅读框序列和氨基酸序列与人细胞色素b5还原酶1(B5R 1)、人638号克隆InRNA均有99%的同源性。结论:100iG07基因编码蛋白可能与细胞的物质代谢密切相关,对1909C01、100iG07基因的进一步研究有助于对胃癌基因表达谱的全面理解。