红景天苷对STZ诱导的糖尿病大鼠晶状体保护作用及机制的研究

来源 :西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liujj08
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目的:通过链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导糖尿病性白内障(Diabetic Cataract,DC)模型,观察不同浓度红景天苷(Salidroside,SAL)对糖尿病大鼠晶状体混浊程度、晶状体上皮细胞(Lens epithelial cells,LECs)线粒体功能、LECs凋亡情况及凋亡蛋白的影响,以探讨红景天苷对STZ诱导的糖尿病大鼠LECs的保护作用及其机制,为寻找降糖药物之外,以线粒体通路凋亡为中心的各种类型白内障的药物治疗与新剂型研发提供新的思路及方向。方法:选择200g左右体重的雄性SPF级SD大鼠50只,在造模前通过裂隙灯显微镜观察初步排除大鼠存在晶状体及眼前节病变,并进行适应性喂养1周后建立I型糖尿病模型。隔夜禁食不禁饮12小时,抽取尾静脉血测定空腹血糖,随机选取40只SD大鼠,称量体重及计算STZ用量后,逐一进行1%STZ-柠檬酸缓冲溶液(60mg/kg)头低尾高位的腹腔注射,剩余10只大鼠进行相同体积分数的柠檬酸钠缓冲溶液的腹腔注射并分作A组(空白对照组),确认大鼠腹腔脏器未损伤后给予水及饲料,自由饮水及饮食,抽取大鼠尾静脉血(72小时后)测量随机血糖,高于16.7mmol/L即认为模型建立成功,若血糖低于16.7mmol/L,则示血糖情况进行1%STZ-柠檬酸缓冲溶液(20-30mg/kg)的腹腔注射追加,将糖尿病模型鼠随机分入不同组别,分别为B组(DM组)、C1组(DM+50mg/kg SAL组)、C2组(DM+100mg/kg SAL组)、C3组(DM+200mg/kg SAL组),C1、C2、C3组大鼠按照相对应的红景天苷溶液浓度进行灌胃处理,每早晨1次,每天尽量保持同一时间点进行灌胃;同时另外2组予以相同体积分数的0.9%氯化钠溶液灌胃,每早晨1次,灌胃均在同一时间段进行,每天观察饮水、饮食、垫料及大鼠全身情况,分别于造模后4w、8w、12w予以尾静脉随机血糖测定并记录,分别于相应时间点对所有大鼠进行10%水合氯醛麻醉后散瞳裂隙灯观察晶状体混浊程度,分级并记录。12w后处死大鼠并快速取出右眼晶状体,利用JC-10染色并结合荧光分光光度计通过计算相对荧光单位测定LECs线粒体膜电位、TUNEL法测LECs凋亡率以及Western-Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果:1、SD大鼠一般情况:整个实验周期中A组大鼠生长良好,饮水、饮食正常,垫料干燥,体重增长符合标准SD大鼠生长曲线。模型组(B组、C组)出现了典型的糖尿病症状,包括多尿、多饮、大便稀及血糖高等,B组及C1组在整个实验过程中可以观察到大鼠精神差,行动迟缓,毛发无光泽,并在实验后期毛发晦暗及脱落,体型瘦小,生长迟缓,并且表现出典型的糖尿病症状,而C2组及C3组虽然造模后出现典型糖尿病症状及表现,随着红景天苷干预的实施,大鼠的饮水量及尿量较B组少,且精神状态可,毛发光泽较糖尿病稍好,死亡率低。2、SD大鼠的血糖监测情况:本实验所选取的SD大鼠造模前血糖值为5.18±1.06mmol/L。造模成功后,B、C组测得血糖均达到造模要求(19.72±2.43mmol/L),并且明显高于A组(P<0.05)。B组在造模及追加STZ注射后保持高血糖水平,对照组A组大鼠在造模后1w到12w血糖均在正常范围内波动,与造模前血糖差异无统计学意义(P>0.05)。C组在造模后,随着干预措施的实施,血糖有不同程度的降低,C1、C2、C3的下降趋势有不同。3、SD大鼠晶状体混浊变化情况:A组大鼠在几个观察时间点均保持晶状体的透明性。B组大鼠于4w可见晶状体周边囊泡形成,但核区晶状体保持透明;8w时可见囊泡增多并向瞳孔区扩展,核区可见少量雾状混浊,12w时晶状体混浊程度进一步加重甚至个别发展为全混浊。C1组于4w时可见晶状体周边囊泡形成,8w时囊泡逐渐增多,向核区扩散,12w时晶状体雾状混浊加重。C2组部分大鼠于4w时出现晶状体周边少量细小的囊泡,12w时可见囊泡增多扩散及晶状体核区轻度雾状混浊。C3组大鼠12w时可见部分大鼠晶状体周边囊泡样改变及核区轻度雾状混浊。4、SD大鼠的LECs线粒体膜电位变化情况:A组大鼠LECs膜电位较B组、C组高,差异具有统计学意义(P<0.05);B组线粒体膜电位最低,其中C1、C2、C3组线粒体膜电位差异有统计学意义(C1组<C2组<C3组)(P<0.05)。5、Western Blot法检测大鼠晶状体Bcl-2、Bax蛋白表达情况:A组Bcl-2蛋白表达最高,B组最低,C1组<C2组<C3组,组间差异均具有统计学意义(P<0.05);A组Bax蛋白表达最低,B组最高,C1组>C2组>C3组,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2、Bax蛋白表达情况与红景天苷浓度有一定关系。6、SD大鼠LECs凋亡情况比较:B组凋亡率最高,与各组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。A组凋亡率最低,A组<C3组<C2组<C1组<B组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、红景天苷可延缓STZ糖尿病大鼠晶状体混浊形成时间及严重程度,对晶状体具有保护作用,此作用呈浓度相关性。2、红景天苷通过改变LECs线粒体膜电位,抑制Bax蛋白表达、促进Bcl-2蛋白表达,影响线粒体PT孔开放,抑制线粒体通路的细胞凋亡,从而发挥对STZ糖尿病大鼠晶状体的保护作用。
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