前言大肠癌为常见的恶性肿瘤之一。其发病率和死亡率在中国排名三、四位。大肠癌的发生是一个涉及多基因改变，和多阶段致癌的复杂过程，其中抑癌基因的异常在大肠癌的发生发展中起重要作用。结直肠癌缺失基因(Deleted colorectal careinoma DCC)是重要抑癌基因，从1990至今已逐步明确DCC基因的失活与大肠癌的发生发展密切相关，其细胞外结构域与神经细胞粘附分子(N-CAM)及其它相关细胞表面糖蛋白的氨基酸序列相似，因此可推测其是通过参与细胞间的信息传导、细胞与细胞、细胞与间质相互作用而在胚胎的发生和细胞分化中起着重要作用，并且DCC蛋白在配体缺乏环境中(如转移或肿瘤生长速度超出局部血供时)，具有肿瘤抑制蛋白的功能，可以诱导细胞凋亡，但在配体Netrin-1存在时，DCC蛋白则具有抗细胞凋亡作用。DCC基因失活与大肠癌进展及预后密切相关，DCC基因参与肿瘤的发生途径之一是可影响凋亡。但是，DCC基因如何影响凋亡基因Bcl-2、Bax，尚未见相关报道，针对上述情况，本研究应用免疫组化s-p法检测74例大肠癌组织中DCC、Bcl-2、Bax蛋白表达情况，试图发现他们之间的内在关系，从而探讨大肠癌的发病机制并为临床诊断和治疗提供依据。材料与方法一、临床资料1、一般资料：收集中国医科大学肿瘤研究所存档的2005年3月-2005年10月临床和病理资料齐全手术切除的大肠癌大体石蜡标本74例。平均年龄51.3岁(32—82)组织学类型：管状腺癌52例、乳头状腺癌14例、粘液腺癌10例、未分化癌1例、腺磷癌1例；分化程度：高分化28例、中分化31例、低分化15例；Dukes分期：A期14例、B期33例、C期22例、D期5例。淋巴结转移：无转移41例，有转移33例。2、实验试剂和仪器：兔抗人DCC克隆抗体购自博士得生物公司、鼠抗人Bcl-2单克隆抗体、鼠抗人Bax单克隆抗体(即用型)、超敏sp试剂盒、DAB显色剂均购自迈新生物公司。CK-2倒置显微镜(日本，OLYMPUS)；UL-1168751H CO2孵育箱(美国)。二、方法所有标本经10％甲醛固定，石蜡重新包埋，4um厚连续切片，1张作HE染色，余作免疫组化。DCC抗体稀释度为1：100，Bcl-2，Bax为即用型，正常大肠组织作阳性对照，用0.01mol／1的PBS(pH7.4)代替一抗作阴性对照。抗原微波修复，S-P法免疫组化具体操作。图像分析处理：将免疫组化切片由摄像系统提取数值化图像输入HPIAS-2000多媒体彩色病理图像分析系统进行处理测定，测得积分光密度进行统计分析。三、统计学方法用SPSS 12.0统计软件进行统计分析。规定P＜0.05或P＜0.01为差异有显著性。结果一、大肠癌中DCC蛋白表达与临床病理指标的关系本试验74例大肠癌组织中，DCC阳性表达34例，阳性率45.9％，阴性表达40例，阴性率54.1％，免疫组化镜下计数及图像分析积分光密度均示DCC蛋白低表达与肿瘤的组织学类型无关(P＞0.05)，淋巴结转移无关(P＞0.05)，而与肿瘤的分化程度(P＜0.05)和Duck分期有关(P＜0.01)。二、大肠癌中Bcl-2基因表达与临床病理指标的关系本实验Bcl-2基因阳性率为60.8％。Bcl-2基因高表达与肿瘤的组织学类型无关(P＞0.05)，与肿瘤的分化程度无关(P＞0.05)、与Duck分期(P＜0.05)和淋巴结转移有关(P＜0.01)。三、大肠癌中BaX基因表达与临床病理指标的关系本实验Bax基因阳性率为48.6％。Bax基因低表达与肿瘤的组织学类型(P＞0.05)及淋巴结转移无关(P＞0.05)，且与肿瘤的分化程度(P＞0.05)Duck分期也无关(P＞0.05)。四、DCC、Bcl-2、Bax在大肠癌中表达与临床病理因素联系在74例标本中，Bcl-2阳性率60.8％，Bax阳性率48.6％，DCC、Bcl-2表达相一致的共23例，占31.1％(23／74)，DCC、Bax表达相一致的共46例，占62.2％(46／74)，统计学发现DCC表达与Bcl-2，和Bax表达具有显著相关性。40例DCC低表达的癌组织中Bcl-2蛋白表达阳性31例(77.5％)。Bax蛋白表达阴性26例(65％)，DCC与Bcl-2表达水平呈负相关(r=-0.201P＜0.05)。与Bax表达水平呈正相关(r=0.296 P＜0.01)。结论DCC基因表达缺失与肿瘤分期及分化程度相关，可作为患者预后指标之一。DCC基因失活导致Bcl-2／Bax反常表达，抑制凋亡发生。可作为DCC基因凋亡分子机制之一。