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喹诺酮类药物由于其抗菌活性强、使用方便、剂型较多等优点,已广泛应用于革兰阴性菌所引起的感染性疾病中,但随着喹诺酮的广泛应用,其耐药性也呈逐年升高趋势,给临床治疗带来很大的困难。肺炎克雷伯菌是临床感染中常见的革兰阴性菌,因此研究肺炎克雷伯菌对喹诺酮类抗生素的耐药特点以及耐药机制,对治疗喹诺酮耐药的肺炎克雷伯菌引起的感染性疾病和开发新的喹诺酮类药物有着重要的理论指导意义。
目的：明确肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的药物敏感性,检测质粒介导的qnr基因存在情况,探讨GyrA和ParC氨基酸改变与喹诺酮耐药的相关性。
方法：收集肺炎克雷伯菌临床分离株231株,K-B纸片法测定细菌对环丙沙星和左氧氟沙星的药物敏感性；常量肉汤稀释法测定肺炎克雷伯菌对环丙沙星的MIC,PCR检测qnr基因存在情况。根据对喹诺酮的敏感性,分别随机选取对喹诺酮敏感和耐药的肺炎克雷伯菌菌株,PCR扩增gyrA基因和parC基因的耐药决定区,扩增片段长度分别为625bp、319bp,PCR产物经纯化后测序,测序结果与GenBank中的标准序列比较,分析其突变情况。
结果：经K-B纸片法检测,130株肺炎克雷伯菌对环丙沙星或左氧氟沙星耐药,对环丙沙星耐药率为44.2％(102/231),对左氧氟沙星耐药率46.8％(108/231),二者都耐药的比率为42.0％株(97/231);肺炎克雷伯菌对环丙沙星的MIC范围0.0078125μg/ml-256μg/ml,MIC50为2μg/ml,MIC90为32μg/ml。4株qnr基因检测阳性,检出率为1.73％(4/231)。肺炎克雷伯菌临床分离株GyrA的变异情况：18株酬药株中有12株出现Ser-83→Leu的改变,并刚时伴有Asp-87→Asn的改变,4株出现Ser-83→Ile的改变；12株敏感株中有5株出现GyrA的变异,分别是Scr-83→Leu、Set-83→Ile、Ser-83→Tyr、Ser-83→Thr和Asp-87→Asn;3株中介菌株中1株有Ser-83→Ile改变。ParC变异情况：9株环丙沙星耐药的肺炎克雷伯菌中,有7株发生Ser-80→Ile改变；3株中介菌株中有1株发生Ser-80→Ile改变；18株敏感株中有3株出现ParC的变异,其中包括1株Ser-80→Ile改变和2株Gly-78→Cys改变。
结论：哈尔滨地区肺炎克雷伯菌对喹诺酮耐药性较高；并已出现质粒介导的qnr耐药基因,但发生率较低；gyrA和ParC基因突变是肺炎克雷伯菌对喹诺酮产生耐药的主要机制。