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民猪是在我国东北地区寒冷条件下形成的地方猪种,具有优秀的抗寒能力,深入研究其抗寒特性的遗传机制对促进民猪优秀遗传资源的应用有重要的意义。表观遗传会受到环境因素的影响,进而改变基因的表达方式。睾丸支持细胞(Sertoli cells,ST)对精子的发育具有重要的支持功能,在民猪的抗寒性状以及雄性的传代中具有重要的作用。因此探索低温下猪ST细胞分子调控机制对研究民猪抗寒性状的表观遗传机理具有参考价值。本研究以体外培养的猪ST细胞为模型,在低温环境下(25℃)培养不同时间(0h、24h、48h、72h)后,观察细胞形态、检测细胞凋亡率、测定3个与凋亡相关的基因半胱天冬酶-3(Caspase-3)、原癌基因(C-myc)、抑癌基因(P53),以及6个与温度相关的miRNA相对表达量变化,以此研究低温对ST细胞的影响;同时构建了两个表观遗传相关重要基因DNA甲基转移酶 3A(DNA methyltransferase 3 alpha,DNMT3A)和 DNA 甲基转移酶 3B(DNA methyltransferase 3 beta,DNMT3B)的过表达ST细胞系,通过细胞划痕试验检测转基因后细胞的迁移能力,并通过Real-time PCR方法检测下游与甲基化、热休克、凋亡相关基因表达变化,获得主要研究结果如下:(1)低温处理24h后ST细胞出现凋亡特征,48h后细胞凋亡特征更加明显;流式细胞仪检测结果也显示随着低温处理时间的延长,细胞凋亡率明显提高。(2)Real-time PCR显示在低温处理过程中,Caspase-3相对表达量显著升高(p<0.01),P53相对表达量极显著降低(p<0.01),C-myc相对表达量先极显著降低(p<0.01)后显著升高(p<0.05)。(3)Real-time PCR检测低温处理过程中6个miRNA的相对表达量变化。结果显示,伴随着处理时间的增加所有检测的miRNA相对表达量均显著升高(p<0.05),其中miR-425-5p、miR-29b在48h时相对表达量达到最高点。(4)成功克隆了大小为2070bp猪的DNMT3A基因完整编码区序列,pcDNA3.1-DNMT3A的真核表达载体构建成功。成功克隆了大小为2382bp猪的DNMT3B基因完整编码区序列,pcDNA3.1-DNMT3B的真核表达载体构建成功。(5)细胞划痕试验结果显示,过表达DNMT3A基因的猪ST细胞与对照组相比,相对迁移速率受到抑制,在划痕后第24h时抑制作用最明显(p<0.05)。过表达DNMT3B基因的猪ST细胞与对照组相比,相对迁移速率受到抑制,在划痕后第24h、48h时抑制作用明显(p<0.05)。(6)在过表达DNMT3A、DNMT3B细胞系中,过表达DNMT3A基因后,EHMT2、HSP70、HSPB1相对表达量显著降低(p<0.05),HDAC1、HMOX1、P53、C-myc相对表达量显著升高(p<0.05)。过表达DNMT3B基因后DNMT3A、HSF1、P53、C-myc相对表达量显著升高(p<0.05)。