随着全球气候的变化及人类对自然越来越多的干预,许多苔藓植物的生存环境遭到破坏。加上其个体微小、结构简单,对环境变化和人类活动更加敏感,消失速度更快。因此应该加强对苔藓植物种质资源的保护。国际上关于苔藓植物种质资源保存的研究,多集中于对配子体超低温保存,而对孢子和芽胞超低温保存未见报道。而国内对于苔藓植物种质资源的保存尚属空白。本项工作针对七种常见的苔藓植物孢蒴、芽胞和配子体进行超低温保存,展开一些基础研究。从孢子和芽胞消毒体系摸索、孢子生活力与萌发率的关系分析以及超低温长期保存方法的可行性研究等方面开展工作,初步建立了一套常见苔藓植物孢蒴、配子体、芽胞保存体系,为进一步保存和保护濒危苔藓植物提供理论和技术的支持。本项研究取得的成果如下：1.利用Knop培养基培养光萼叶苔(Jungermannia leiantha)孢子,表明用0.05%的次氯酸钠消毒1min效果最佳。对金发藓(Polytrichum commune)和细叶小羽藓(Haplocladium microphyllum)的最佳培养条件进行了摸索,结果发现当光强为3000～3200Lx,温度25℃,2种藓类孢子萌发率最高,金发藓接近80%,细叶小羽藓为87%左右。2.采用碘-碘化钾染色法、TTC染色法、红墨水染色法、亚甲基蓝染色法对金发藓(Polytrichum commune)、反扭藓(Timmiella anomala)、梨蒴珠藓(Bartramia pomiformis)、卵叶泥炭藓(Sphagnum ovatum)、侧枝匍灯藓(Plagiomnium maximoviczii)、近缘紫萼藓(Grimmia affinis)6种藓类植物孢子的生活力进行测定,并将测得的生活力结果与孢子萌发率进行了比较分析。结果表明,亚甲基蓝染色法测定的藓类植物孢子平均生活力百分率与孢子平均萌发率最为接近,且染色效果明显,可用于苔藓植物孢子生活力的快速测定。3.通过对干燥时间及预处理温度等超低温保存条件的实验探索,筛选出金发藓、近缘紫萼藓(Grimmia affinis)、侧枝匍灯藓(Plagiomnium maximoviczii)和细叶小羽藓孢子超低温最适保存条件,利用最适保存条件对细叶小羽藓孢子进行不同时间的超低温保存研究。结果表明：(1)金发藓、近缘紫萼藓和侧枝匍灯藓3种藓类孢子的超低温最适保存条件为：硅胶干燥4～5h,4℃低温预处理1d；(2)细叶小羽藓孢子超低温最适保存条件为：硅胶干燥5h、-20℃低温预处理1d和室温自来水化冻15min左右,得到的平均萌发率最高为88.26%；(3)液氮保存1d后的细叶小羽藓孢子平均萌发率为88.26%,保存30d后的孢子平均萌发率降为6.03%,而保存90d后平均萌发率又出现上升的趋势,达88.47%,保存180d后平均萌发率仍维持在49.46%,相对保持率为63.49%。保存前后孢子分化出的配子体在形态上无明显差异。因此,使用液氮超低温长期保存细叶小羽藓孢子是可行的。4.对粗叶泥炭藓(Sphagnum squarrosum)和小立碗藓(Physcomitrella patens)茎尖进行了包埋玻璃化法超低温保存初步研究。结果表明,将继代生长10周的粗叶泥炭藓和小立碗藓无菌苗置4℃冰箱低温锻炼7d,在无菌条件下切取1.0～1.5cm茎尖,转置预培养基(Knop+0.1mol/L蔗糖+0.1mol/L甘油)中,4℃预培养3d,然后用3%海藻酸钠和0.1mol/L CaCl2包埋,包埋珠用Knop+180g/L甘油+90g/L乙二醇+90g/L二甲基亚砜+0.2mol/L蔗糖在0℃下装载30min,用100%PVS2在0℃下脱水60min,迅速投入液氮,24h后用40℃水浴快速化冻2min,再用Knop+0.4mol/L蔗糖溶液洗涤2～3次,转入Knop固体培养基中培养,获得的成活率最高,分别为42.41%和44.48%。再生植株与常温保存植株形态指标差异不大。5.摸索了不同干燥时间对地钱(Marchantia polymorpha)芽胞超低温保存后萌发率的影响,并用最适干燥条件对芽胞进行不同时间梯度的液氮保存,结果表明：硅胶干燥3h,液氮保存1d后芽胞的萌发率最高(68.33%)；硅胶干燥3h的芽胞液氮保存75d时,干燥3h的芽胞萌发率仍具有58.49%,与新鲜对照的芽胞萌发率(94.45%)相比下降了38.07%,但并未完全丧失。