可口革囊星虫标准组分制备及物质基础研究

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可口革囊星虫(Phascolosoma esulenta)隶属于星虫动物门Sipuncula革囊星虫属Phascolosoma动物,又称泥蒜,土钉,海冬虫夏草等,为我国各地著名小吃,在我国多部药典中也有记载。具有抗氧化、抗疲劳、耐高温和调节生理机能等药理活性。本论文采用HPLC技术对可口革囊星虫不同组分进行分析表征,通过不断优化HPLC条件,建立了各组分的HPLC指纹图谱,并重点对可口革囊星虫各组分的抗凝血和抗氧化活性进行活性研究,建立其功能组分库。这为可口革囊星虫的质量评价提供了可靠的方法,为可口革囊星虫的成药提供了科学依据,也为其进一步的研究奠定了坚实的基础。本课题主要包括以下三个方面:采用超声提取的方法,用不同极性的溶剂对可口革囊星虫进行组分提取,得到各粗提组分E1、E2、E3、E4、E5和W、M、J。使用多种分离手段(溶剂分配,MCI树脂,硅胶树脂)对已获得的粗提组分进一步的分离,得到8个溶剂分配组分,12个MCI树脂分离组分,17个硅胶柱分离组分,共得到45个可口革囊星虫标准组分。确定了可口革囊星虫的系统分离方法,建立了可口革囊星虫的标准组分库。利用HPLC和TLC技术对以上所得各组分进行化学表征。其中薄层色谱中,显色剂均为香草醛-硫酸显色剂,组分E2的MCI树脂分离组分的展开剂为正丁醇:乙酸乙酯:水=9:1:10,而组分E4的硅胶柱分离组分为石油醚:乙酸乙酯:甲醇=2:3:0.2时,样品的成点性较好,展开明显。高效液相色谱中,均采用SymmetryC18柱,1mL/min的流速的条件,洗脱剂为水-甲醇系统,组分E2和E4、E5的柱分离组分及溶剂分配组分分别使用206nm、208nm和的检测波长进行检测,粗提组分的检测波长为214nm,从HPLC图谱中可看出各组分均得到较好的分离。另外采用PMP衍生的方法对各多糖提取组分W、J和M进行单糖组成分析发现,可口革囊星虫中含有的单糖品种至少有8种。由以上方法建立可口革囊星虫的HPLC指纹图谱,完善我国的中药指纹图谱库,为可口革囊星虫的药理活性研究提供依据。对可口革囊星虫的药理活性研究主要集中于抗凝血和抗氧化活性研究。采用活化部分凝血酶时间(APTT)测定来反应可口革囊星虫的抗凝血活性,实验结果表明在所有组分中,E3组分活性最好,但凝血时间仅比空白组延长1.08s,即可口革囊星虫各组分基本无抗凝血活性。本课题中采用各组分对羟自由基,DPPH自由基和超氧自由基的清除率来表示该组分的抗氧化能力。各多糖提取组分对羟自由基的清除能力有限,当浓度为2mg/mL时,酶提组分M的清除能力最强,清除率可达55.44%,而该浓度的Vc对照液的清除率达99%以上。各组分均对DPPH自由基有良好的清除能力,其中95%乙醇提取组分E1的清除率最高,可达60.44%。组分W、M、J和E1可促进邻苯三酚的自氧化,而组分E3、E4和E5有清除超氧自由基的作用,但活性较低。综上所述,可口革囊星虫各组分基本无抗凝血活性,但有不同程度的抗氧化能力。
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