PI3K-AKT通路与大鼠蛛网膜下腔出血后基底动脉内皮细胞凋亡的实验研究

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目的通过改良方法建立大鼠蛛网膜下腔出血动物模型,对实验大鼠基底动脉内皮细胞进行形态学检测及病理检查,探讨PI3K-AKT通路在大鼠蛛网膜下腔出血后基底动脉内皮细胞凋亡中的意义。方法采用改良枕大池二次注血法建立蛛网膜下腔出血模型,给药方法为脑室内给药。84只清洁级SD大鼠随机分为A组(对照组)、B组(SAH组)、C组(SAH+PI3K-AKT通路激动剂IGF-1组),每组按SAH后1d、3d、7d、11d时间点分成4个亚组(n=7),相应时间点甲醛灌注取脑后透射电子显微镜观察并原位末端标记技术(TUNEL)检测三组大鼠基底动脉内皮细胞凋亡;Western blot方法测定不同时间点基底动脉P-AKT、 caspase-3表达水平。结果1.透射电子显微镜观察:与对照组(A组)比较,SAH后第3、7天B组、C组内皮细胞出现凋亡样变化,血管内皮细胞膜起泡,胞质凝聚,胞浆空泡变,核染色质凝聚、趋边,以B组更显著。到SAH后第11天B、C组上述情况减轻,以C组更显著。2.TUNEL检测:B、C两组组在SAH后3、7天均出现细胞凋亡,以B组更显著;而到SAH后11天B、C组凋亡程度有所缓解,以C组更显著。3Western blot检测P-AKT和caspase-3的蛋白表达,与内参β-actin比较测灰度值。结果显示:(1)SAH后第3、7天C组P-AKT的表达显著高于A组,而B组P-AKT的表达与A组比较差异无统计学意义,B、C两组caspase-3的表达均高于A组,以B组更显著;(2)而到SAH后11天C组caspase-3的表达与3、7天比较明显降低;而B组P-AKT表达增加,与A组比较差异有统计学意义,caspase-3的表达则有所下降。结论1.蛛网膜下腔出血后基底动脉内皮细胞出现凋亡样变化;2.基因AKT与caspase-3在SAH后基底动脉中均有表达,在不同时间点表达量有差异,并呈负相关关系。3.PI3K-AKT通路可能参与了SAH后基底动脉内皮细胞凋亡的过程,P-AKT表达增加可以缓解基底动脉内皮细胞的凋亡程度。
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