胶质母细胞瘤（glioblastoma,GBM）是中枢神经系统中恶性程度最高、侵袭迁移能力最强、预后最差的肿瘤之一,尽管近年来以手术切除为主并辅助以同步放化疗的序贯化标准化治疗方案可使患者一定程度获益,但患者的中位生存期仍未超过15个月^[1,2]。肿瘤细胞具有即使在氧气存在的情况下依旧倾向于糖酵解的这种无氧糖代谢方式（Warburg effect）^[3-5]。而由于其特殊的代谢方式使得肿瘤细胞相对于正常组织细胞处于一种弱酸性的微环境中^[6]。正常的组织细胞处于一种细胞内相对于细胞外偏酸性的酸碱理化特点,而肿瘤细胞则相反,细胞内相对于细胞外偏碱性,而细胞外偏酸性,并且越接近肿瘤密度最高的核心区,其酸性PH值越低。现有研究表明,胶质瘤细胞最核心处PH值最低可达5.9,平均PH值约为6.8,而正常的对照脑组织的PH值平均约为7.1。酸性肿瘤微环境可以通过不同的机制促进胶质瘤细胞的干性表达^[7]、增强其及侵袭迁移能力^[8]、促进细胞自噬^[9,10]、抑制免疫细胞的免疫应答。CD44是一种胞膜表达的糖蛋白,在包括胶质瘤的多种肿瘤组织中均高表达,其表达量随胶质瘤的恶性程度逐级递增,并且被提示与胶质母细胞瘤的侵袭能力相关。CD44可作为胞外骨桥蛋白^[11]、透明质酸^[12]的受体并影响胶质瘤细胞的侵袭迁移能力。最新的研究表明缺氧条件下可促进胶质瘤细胞胞内域及胞外域的高表达从而促进其维持干性。数据表明CD44高表达的GBM患者总生存期较短、预后较差。酸性的肿瘤微环境与胶质瘤细胞的侵袭迁移能力以及CD44在其中扮演着何种角色,目前鲜有人研究。本文中,我们使用培养基酸碱滴定法人为构建了弱酸性的细胞培养环境观察弱酸性的微环境对胶质瘤细胞形态及其侵袭迁移能力的影响,并且检测了酸性肿瘤微环境对CD44表达变化的影响并探究其内在可能机制,同时使用慢病毒搭载的小发夹RNA（sh-RNA）敲低了CD44的蛋白表达水平,观察对胶质瘤细胞侵袭、侵袭能力的影响,进而探究酸性肿瘤微环境通过影响CD44的表达从而影响胶质瘤细胞侵袭迁移能力并探究其内在的可能机制。本课题旨在研究酸性肿瘤微环境通过影响CD44的表达进而影响胶质瘤细胞的侵袭迁移能力并探究其内在机制。本文分为以下三个部分:1、CD44的表达量与胶质瘤病理级别以及组织学来源间的关系,CD44在胶质母细胞瘤的表达与预后的关系以及CD44在胶质母细胞瘤亚型分型中的差异。通过R2Bio可视化生物信息分析平台,我们使用French、Lee、Sun等多个数据库分析不同病理级别胶质瘤患者CD44表达的mRNA水平,我们可以得出结论:CD44的表达量与胶质瘤病理级别相关。通过R2Bio可视化生物信息分析平台分析包括French数据库280例各个级别胶质瘤患者及TCGA数据库540胶质母细胞瘤患者的多个数据库中的分子学数据,我们发现CD44表达量与患者预后相关。通过分析TCGA-540例胶质瘤患者亚型分型分析,CD44在间质型胶质母细胞瘤患者中的表达量是最高的。2、酸性肿瘤微环境对胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响及对CD44表达的影响。我们利用酸碱滴定法人为构造常氧酸性的体外培养环境,通过transwell实验检测与常规PH对照（PH=7.4）,酸性条件（PH=6.4）对胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响,同时通过WB检测对HIF-2α及CD44表达的影响。3、CD44通过Src介导调控胶质瘤细胞的侵袭迁移能力。我们使用慢病毒搭载的小发夹RNA（sh-RNA）敲低CD44的表达,在体外检测其侵袭迁移能力的变化。通过检测酸性处理组,无处理对照组Src磷酸化水平的变化,及sh-NC组与sh-CD44组侵袭相关的N型钙粘素（N-Ca）、波形蛋白（Vimentin）及基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达量的变化,提示在CD44可以激活下游Src磷酸化水平从而促进侵袭相关蛋白的表达从而促进其侵袭迁移能力。结论:1、CD44的表达量随着胶质瘤病理级别的升高而增高。CD44在星形细胞来源的胶质瘤细胞的表达量要高于少突胶质细胞来源。相对于胶质母细胞瘤的其他亚型,CD44在间质型胶质母细胞瘤患者中表达量最高;CD44与胶质母细胞瘤患者的预后相关,CD44表达量高的患者总体预后较差。2、体外酸性培养环境可以使星形细胞来源的U87细胞系呈网状生长,而U251细胞系形态无显著改变。酸性的微环境可以通过促进胶质瘤细胞中HIF-2a的表达量促进CD44的表达。3、体外酸性环境下胶质瘤细胞侵袭迁移能力增强,敲低CD44后胶质瘤细胞的侵袭迁移能力明显下降。体外酸性培养环境可以通过促进胶质瘤细胞高表达CD44促进其的侵袭迁移能力,可能是通过促进Src磷酸化水平增高实现。